Präparation Oenocytes von Adult Drosophila melanogaster</em
Summary
Bei den Insekten produzieren oenocytes Kutikula Kohlenwasserstoffverbindungen. Diese Verbindungen gegen Austrocknung zu schützen und zu erleichtern chemische Kommunikation. Hier zeigen wir eine Dissektionstechnik verwendet, um die oenocytes von Erwachsenen zu isolieren<em> Drosophila melanogaster</em>, Und zeigen, wie diese Vorbereitung genutzt werden, um Gene in Kohlenwasserstoff-Synthese beteiligt zu studieren.
Abstract
In<em> Drosophila melanogaster</em>, Wie in anderen Insekten, bietet eine wachsartige Schicht auf der äußeren Oberfläche der Kutikula, vor allem der Kohlenwasserstoff-Verbindungen bestehen, Schutz vor Austrocknung und andere ökologische Herausforderungen. Mehrere dieser Kutikula Kohlenwasserstoff (CKW)-Verbindungen auch als chemisch vermittelte Signale, und als solche zu vermitteln Pheromone Kommunikation zwischen Mitgliedern der gleichen Spezies oder in einigen Fällen zwischen verschiedenen Arten und das Verhalten beeinflussen. Spezialisierte Zellen genannt oenocytes werden als der primäre Ort für die CHC-Synthese betrachtet. Allerdings ist relativ wenig bekannt über die Beteiligung der oenocytes in der Regulation der Biosynthese, Transport und Ablagerung Wege einen Beitrag zur CHC-Ausgang. Angesichts der wichtigen Rolle, die CKW in verschiedene Aspekte der Insekten Biologie, einschließlich der chemischen Kommunikation, Austrocknung Widerstand und Immunität zu spielen, ist es wichtig, ein besseres Verständnis der molekularen und genetischen Regulierung der CHC Produktion innerhalb dieser spezialisierten Zellen zu gewinnen. Die erwachsenen oenocytes der<em> D. melanogaster</em> Sind in der Bauchhaut liegt, und sind metamerically in bandartige Cluster strahlende entlang der inneren Kutikula Oberfläche jedes Abdominalsegment angeordnet. In diesem Video-Artikel zeigen wir eine Dissektionstechnik für die Herstellung von oenocytes von Erwachsenen benutzt<em> D. melanogaster</em>. Ausdrücklich stellen wir eine detaillierte Schritt-für-Schritt-Demonstration (1), wie Filet vorbereiten eines Erwachsenen<em> Drosophila</em> Bauch, (2) wie zur Identifizierung der oenocytes und erkennen sie von anderen Geweben, und (3), wie man intakte oenocyte Cluster von der Bauchhaut zu entfernen. Eine kurze experimentelle Illustration dessen, wie diese Vorbereitung kann verwendet werden, um die Expression von Genen in Kohlenwasserstoff-Synthese beteiligt zu untersuchen ist im Preis inbegriffen. Die seziert Vorbereitung gezeigt, hier wird für die detaillierte molekulare und genetische Analyse der oenocyte Funktion im erwachsenen Fruchtfliege zu ermöglichen.
Protocol
Discussion
In diesem Video-Artikel präsentieren wir Ihnen eine detaillierte Analyse-Protokoll für die Vorbereitung der oenocytes aus adulten D. melanogaster in einer geeigneten Art und Weise für die molekulare Analyse. Eine gekürzte Text-basierte Darstellung der Dissektion Methode wurde an anderer Stelle 2, beschrieben und die daraus resultierenden oenocyte Vorbereitung hat sich gezeigt, angemessen für die Extraktion der beiden RNA-und Protein-2. Mit dieser Vorbereitung kann es auch möglich, Me…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Wir möchten Amsale Belay für ihre Unterstützung danken Dreharbeiten zu diesem Video Artikel. Diese Arbeit wurde von CIHR, NSERC und CRC gewährt JDL finanziert.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Sylgard | Dow Corning | |||
| Tungsten Wire | Ted Pella, Inc. | 27-11 | 0.005”/20’ | |
| Forceps | Dumont | 11252-30 | #5 | |
| Shields and Sang M3 Insect Medium | Sigma | S3652 | ||
| RNeasy Micro Kit | Qiagen | 74004 | ||
| qScript cDNA Synthesis Kit | Quanta Biosciences | 95047-100 | ||
| Monoject Hypodermic Needle | Harvard Apparatus | 722289 | 20G1 with aluminum hub |
Riferimenti
- Wielowiejski, H. Ueber das blutgewebe der insekten. Zeit. Wiss. Zool. 43, 512-536 .
- Krupp, J. J., Kent, C., Billeter, J. C., Azanchi, R., So, A. K., Schonfeld, J. A., Smith, B. P., Lucas, C., Levine, J. D. Social experience modifies pheromone expression and mating behavior in male Drosophila melanogaster. Curr. Biol. 18, 1373-1383 (2008).
- Locke, M. Surface membranes, Golgi complexes, and vacuolar systems. Annu. Rev. Entomol. 48, 1-27 (2003).
- Billeter, J. C., Atallah, J., Krupp, J. J., Millar, J. G., Levine, J. D. Specialized cells tag sexual and species identity in Drosophila melanogaster. Nature. 461, 987-991 (2009).
- Gould, A. P., Elstob, P. R., Brodu, V. Insect oenocytes: a model system for studying cell-fate specification by Hox genes. J. Anat. 199, 25-33 (2001).
- Lawrence, P. A., Johnston, P. Cell lineage of the Drosophila abdomen: the epidermis, oenocytes and ventral muscles. J. Embryol. Exp. Morphol. 72, 197-208 (1982).
- Johnson, M. B., Butterworth, F. M. Maturation and aging of adult fat body and oenocytes in Drosophila as revealed by light microscopic morphometry. J. Morphol. 184, 51-59 (1985).
- Gutierrez, E., Wiggins, D., Fielding, B., Gould, A. P. Specialized hepatocyte-like cells regulate Drosophila lipid metabolism. Nature. 445, 275-280 (2007).
- Marcillac, F., Bousquet, F., Alabouvette, J., Savarit, F., Ferveur, J. F. A mutation with major effects on Drosophila melanogaster sex pheromones. Genetica. 171, 1617-1628 (2005).
- Chertemps, T., Duportets, L., Labeur, C., Ueyama, M., Wicker-Thomas, C. A female-specific desaturase gene responsible for diene hydrocarbon biosynthesis and courtship behaviour in Drosophila melanogaster. Insect Mol. Biol. 15, 465-473 (2006).
- Legendre, A., Miao, X. X., Da Lage, J. L., Wicker-Thomas, C. Evolution of a desaturase involved in female pheromonal cuticular hydrocarbon biosynthesis and courtship behavior in Drosophila. Insect. Biochem. Mol. Biol. 38, 244-255 (2008).
- Shirangi, T. R., Dufour, H. D., Williams, T. M., Carroll, S. B. Rapid evolution of sex pheromone-producing enzyme expression in Drosophila. PLoS Biol. 7, e1000168-e1000168 (2009).
