La disección de Oenocytes de Adultos Drosophila melanogaster</em
Summary
En los insectos, el oenocytes producir compuestos cuticulares de hidrocarburos. Estos compuestos protegen contra la desecación y facilitar la comunicación química. Aquí se demuestra una técnica de disección para aislar el oenocytes de los adultos<em> Drosophila melanogaster</em>, Y muestran cómo esta preparación se puede utilizar para estudiar los genes implicados en la síntesis de hidrocarburos.
Abstract
En<em> Drosophila melanogaster</em>, Como en otros insectos, una capa de cera sobre la superficie exterior de la cutícula, compuesto principalmente de compuestos de hidrocarburos, proporciona protección contra la desecación y otros problemas ambientales. Varios de estos compuestos de hidrocarburos cuticulares (CHC) también funcionan como señales de semioquímicos, y como tal mediar comunicación feromonal entre los miembros de la misma especie, o en algunos casos entre las diferentes especies, y el comportamiento de influencia. Las células especializadas a que se refiere como oenocytes son consideradas como el sitio principal para la síntesis de CHC. Sin embargo, se sabe relativamente poco sobre la participación de la oenocytes en la regulación de la biosíntesis, transporte y deposición de las vías que contribuyen a la producción de CHC. Teniendo en cuenta el importante papel que juegan los CSC en varios aspectos de la biología de los insectos, incluyendo la comunicación química, resistencia a la desecación, y la inmunidad, es importante para obtener una mayor comprensión de la regulación molecular y genética de la producción de CHC dentro de estas células especializadas. El oenocytes adultos de<em> D. melanogaster</em> Se encuentran en el tegumento abdominal, y se metamerically dispuestos en forma de cinta grupos irradiado a lo largo de la superficie interior de la cutícula de cada segmento abdominal. En este artículo de vídeo que demuestran una técnica de disección utilizados para la preparación de oenocytes de los adultos<em> D. melanogaster</em>. En concreto, ofrecemos un detallado paso a paso la demostración de (1) la forma de preparar filete de un adulto<em> Drosophila</em> Abdomen, (2) la manera de identificar la oenocytes y discernir los de otros tejidos, y (3) cómo quitar intacta grupos oenocyte del tegumento abdominal. Una breve ilustración experimental de cómo esta preparación se puede utilizar para examinar la expresión de genes implicados en la síntesis de hidrocarburos se incluye. La preparación disecada demostrado en este documento permitirá el análisis detallado moleculares y genéticos de la función oenocyte en la mosca de la fruta adultas.
Protocol
Discussion
En este artículo de vídeo se presenta un protocolo de disección detallada para la preparación de la oenocytes de adultos de D. melanogaster de una manera adecuada para el análisis molecular. Un texto basado abreviado en cuenta el método de disección ha sido descrito en otra 2, y la preparación resultante oenocyte ha demostrado ser adecuado para la extracción de ARN y proteínas 2. El uso de este preparado también puede ser posible desarrollar métodos para el cultivo de oenocytes…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Nos gustaría dar las gracias a Amsale Belay por su ayuda en la filmación de este artículo de vídeo. Este trabajo fue financiado por CIHR, NSERC y subvenciones CRC a JDL.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Sylgard | Dow Corning | |||
| Tungsten Wire | Ted Pella, Inc. | 27-11 | 0.005”/20’ | |
| Forceps | Dumont | 11252-30 | #5 | |
| Shields and Sang M3 Insect Medium | Sigma | S3652 | ||
| RNeasy Micro Kit | Qiagen | 74004 | ||
| qScript cDNA Synthesis Kit | Quanta Biosciences | 95047-100 | ||
| Monoject Hypodermic Needle | Harvard Apparatus | 722289 | 20G1 with aluminum hub |
Riferimenti
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