포유류의 CNS에서 시신경의 절개 후 실험에 대한 노는 방법
Summary
시신경의 절개면은 성인 CNS 손상의 널리 사용되는 모델입니다. 이 모델은 전 세계적으로 망막을 대상에 직접 망막 신경절 세포의 부상의 연결 인구를 대상으로 실험 조작의 번호를 수행하는 데 이상적입니다.
Abstract
망막 신경절 세포 (RGCs)는 CNS의 뉴런되는 시신경을 통해 뇌로 망막의 출력 영상 정보. 시신경은 안구의 궤도 내에서 액세스하고 완전히 전체 인구의 RGC axons를 절단 (axotomized) 그었 수 있습니다. 시신경의 절개면은 성인 CNS 1-4에서 apoptotic 세포의 연결을 죽음의 재현성 모델입니다. 눈 유리체 챔버가 intraocular 주사를 통해 실험 조작을 허용, 망막에 약물 전달 캡슐 역할을하기 때문에이 모델은 특히 매력적입니다. 유리 체액을 통해 화학 물질의 확산들은 전체 인구 RGC에 따라 행동을 보장합니다. 바이러스성 벡터, plasmids 또는 짧은 방해 RNAS는 (siRNAs)도 5-12를 망막 세포를 감염 또는 transfect하기 위해 유리 챔버로 전달하실 수 있습니다. Adeno – 관련 바이러스 (AAV) 벡터의 높은 tropism은 주사 사이트 6, 7, 13-15 가까운 세포의 90 %를 접근 감염 속도와 대상 RGCs에 유용합니다. 또한, RGCs은 선택적으로 그들의 목표 우수한 colliculus 10으로 시신경 16-19 또는 주입 벡터의 컷 끝까지 siRNAs, plasmids, 또는 바이러스성 벡터를 적용하여 transfected 수 있습니다. 이것은 연구자들이 다른 방관자의 뉴런이나 주변 glia에 혼란함을 주죠 효과없이 부상의 연결 인구 apoptotic 메커니즘을 공부하실 수 있습니다. RGC apoptosis는 세포 죽음은 세포가 빠르게 타락한 이후 3~4일의 postaxotomy을 지연 의하여 시간 코스 특성이 있습니다. 이것은 apoptosis에 관련된 경로에 대한 이동 실험 조작에 창을 제공합니다. 직접 가로 시신경 스텀프에서 RGCs를 대상으로 노는 즉시 신경을 절단 후, axotomy의 시간에 수행됩니다. 대조적으로, 물질 intraocular 경로를 통해 전달하는 경우, 그들은 axotomized RGCs에서 apoptosis의 개시를 이전, 이전에 수술이나 수술 후 첫 3 일 이내에 주입 수 있습니다. 현재 기사에서 우리는 시신경의 절개 후 실험 조작을위한 여러 가지 방법을 보여줍니다.
Protocol
Discussion
시신경의 절개면은 성인 CNS의 신경 세포의 apoptosis의 높은 재현성 모델입니다. 이 원고에서 보여준 실험 조작은 부상 후 RGC apoptosis의 메커니즘 연구를 허용합니다.
Intraocular 주사는 망막의 전세계를 타겟하는 데 유용합니다. 그것이 유리 피펫의 끝에있는 렌즈를 다치게하지 않는 것이 중요합니다 같은이 절차는 연습이 필요합니다. 렌즈 손상은 세포 생존과 재생 20, 21을</s…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
PDK는 CIHR 운영 그랜트 (청소 86,523)에 의해 지원됩니다
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Stereotaxic Frame | Stoelting, Kopf, WPI | |||
| Rat Gas Mask | Stoelting, Kopf, WPI | |||
| Anesthesia System | VetEquip | 901806 | ||
| Isoflurane (PrAErrane) | Baxter Corp | DIN 02225875 | ||
| Surgical Microscope | WPI, Zeiss, Leica | |||
| Alcaine Eye Drops | Alcon | |||
| Tears Naturale P.M. | Alcon | |||
| Fine tip Dumont forceps | Fine Science Tools | 11252-00 | ||
| 10 μl Hamilton Syringe (1701RN; 26s/2”/2) | Hamilton Syringe Co. | 80030 | ||
| 1/16 inch Compression Fittings | Hamilton Syringe Co. | 55751-01 | ||
| 1/16 inch OD, 0.010 inch ID, PEEK Tubing | Supelco, Bellefonte, PA | Z226661 | ||
| Dual RN Glass Coupler | Hamilton Syringe Co. | 55752-01 | ||
| Mineral Oil Priming Kit: includes syringe, needles, rubber septa | Hamilton Syringe Co. | PRMKIT |
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