Une introduction au laboratoire Worm: La culture de Worms à la mutagenèse
Summary
Le dépistage de mutants avec des défauts phénotypique est une méthode simple pour identifier les gènes qui fonctionnent dans un processus biologique donné. Dans cet article, nous décrivons comment les vers la culture vivante gratuit (par exemple,<em> Pristionchus pacificus</em>) Dans le laboratoire et montrent deux méthodes différentes mutagenèse, EMS et TMP / UV.
Abstract
Ce protocole décrit les procédures pour maintenir les nématodes dans le laboratoire et la façon de les mutagénéiser en utilisant deux méthodes alternatives: méthanesulfonate d'éthyle (EMS) et 4, 5, 8-trimethylpsoralen combinée avec la lumière ultraviolette (TMP / UV). Les nématodes sont de puissants systèmes biologiques pour les études génétiques en raison de leur plan d'organisation simple et le système d'accouplement, qui est composé d'auto-fertilisation hermaphrodites et mâles qui peuvent générer des centaines de descendants par animal. Les nématodes sont maintenus dans des boîtes de gélose contenant un tapis de bactéries et peuvent être facilement transférés d'une plaque à l'autre en utilisant un médiator. EMS est un agent alkylant couramment utilisés pour induire des mutations ponctuelles et de petites délétions, tandis que la TMP / UV induit principalement des suppressions. Selon l'espèce de nématode utilisé, les concentrations de l'EMS et TMP devront être optimisés. Pour isoler des mutations récessives de l'pacificus nématodes Pristionchus, les animaux de la génération F2 étaient visuellement dépistage de phénotypes. Pour illustrer ces méthodes, nous mutagénisées vers et cherché non coordonnés (UNC), plutôt moche (dpy) et transformateur (TRA) des mutants.
Protocol
Discussion
La mutagenèse est une technique largement utilisée pour des études génétiques dans divers organismes modèles expérimentaux. Expériences de mutagenèse sont souvent utilisés pour identifier la fonction d'un gène 2. Les procédures de mutagénèse décrites ici peuvent être utilisées non seulement pour P. pacificus, mais aussi pour C. elegans et d'autres espèces de nématodes connexes. Nous décrivons ici deux méthodes, EMS et TMP / UV mutagenèse.
<p class="jove_cont…Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ce travail a été financé par la NSF accorde IOB # 0615996.
Riferimenti
- Brenner, S. . Genetica. 77 (1), 71-71 (1974).
- Anderson, P. . Methods Cell Biol. 48, 31-31 (1995).
- Yandell, M. D., Edgar, L. G., Wood, W. B. . Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 91 (4), 1381-1381 (1994).
- Pires-daSilva, A. . WormBook. , 1-1 (2005).
- Kenning, C., Kipping, I., Sommer, R. . J. Genesis. 40 (3), 176-176 (2004).
- Sommer, R. J., Carta, L. K., Kim, S. Y. . Fundamental and Applied Nematology. 19 (6), 511-511 (1996).
- Pires-daSilva, A., Sommer, R. J. . Genes & development. 18 (10), 1198-1198 (2004).
- Wei, A., Yuan, A., Fawcett, G. . Nucleic acids research. 30 (20), 110-110 (2002).
- Jorgensen, E. M., Mango, S. E. . Nat Rev Genet. 3 (5), 356-356 (2002).
