An Introduction to Worm Lab: von Kultivierung Worms zu Mutagenese
Summary
Das Screening nach Mutanten mit phänotypischen Defekte ist eine einfache Methode zur Identifizierung von Genen, die in einem bestimmten biologischen Prozess funktionieren. In diesem Artikel beschreiben wir, wie die Kultur frei lebenden Würmer (z. B.<em> Pristionchus pacificus</em>) Im Labor und zeigen zwei verschiedene Mutagenese-Verfahren, EMS und TMP / UV.
Abstract
Dieses Protokoll beschreibt Verfahren, die Nematoden im Labor und wie man sie mutagenisieren mit zwei alternative Methoden zu halten: Ethylmethansulfonat (EMS) und 4, 5 ', 8-Trimethylpsoralen mit ultraviolettem Licht (TMP / UV) kombiniert. Nematoden sind leistungsfähige biologische Systeme für genetische Studien wegen ihrer einfachen Körperbau und der Paarung, das aus sich selbst befruchtende Zwitter und Männchen, die hunderte von Nachkommen pro Tier erzeugen kann zusammengesetzt ist. Nematoden sind in Agarplatten mit einem Rasen von Bakterien erhalten und kann leicht von einer Platte zur anderen mit einem Pick übertragen werden. EMS ist ein Alkylierungsmittel häufig verwendet, um Punktmutationen und kleine Deletionen induzieren, während TMP / UV hauptsächlich induziert Löschungen. Je nach Art der Nematoden eingesetzt werden Konzentrationen von EMS und TMP müssen optimiert werden. Zur Isolierung rezessive Mutationen des Nematoden Pristionchus pacificus wurden die Tiere der F2-Generation visuell auf Phänotypen gescreent. Zur Veranschaulichung dieser Methoden, mutagenisierten wir Würmer und suchte Unkoordinierte (UNC), Dumpy (dpy) und Trafo (Tra) Mutanten.
Protocol
Discussion
Mutagenese ist eine weithin angewandte Technik für genetische Studien in verschiedenen experimentellen Modell-Organismen. Mutagenese-Experimente werden häufig verwendet, um die Funktion eines Gens 2 zu identifizieren. Die Mutagenese hier beschriebenen Verfahren können nicht nur für P. verwendet werden pacificus, sondern auch für C. elegans und anderen verwandten Nematoden. Hier beschreiben wir zwei Methoden, EMS und TMP / UV-Mutagenese.
EMS ist eine…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Diese Arbeit wurde von NSF gewähren IOB # 0615996 gefördert.
Riferimenti
- Brenner, S. . Genetica. 77 (1), 71-71 (1974).
- Anderson, P. . Methods Cell Biol. 48, 31-31 (1995).
- Yandell, M. D., Edgar, L. G., Wood, W. B. . Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 91 (4), 1381-1381 (1994).
- Pires-daSilva, A. . WormBook. , 1-1 (2005).
- Kenning, C., Kipping, I., Sommer, R. . J. Genesis. 40 (3), 176-176 (2004).
- Sommer, R. J., Carta, L. K., Kim, S. Y. . Fundamental and Applied Nematology. 19 (6), 511-511 (1996).
- Pires-daSilva, A., Sommer, R. J. . Genes & development. 18 (10), 1198-1198 (2004).
- Wei, A., Yuan, A., Fawcett, G. . Nucleic acids research. 30 (20), 110-110 (2002).
- Jorgensen, E. M., Mango, S. E. . Nat Rev Genet. 3 (5), 356-356 (2002).
