Solucan Lab An Introduction to: Kültürleme Worms Mutagenez
Summary
Tarama fenotipik defekti olan mutantlar için, belirli bir biyolojik süreç fonksiyonu genleri tanımlamak için basit bir yöntem. Bu yazıda, kültür serbest yaşayan solucanlar (örneğin, nasıl tarif<em> Pristionchus pacificus</em>) Laboratuvar ve iki farklı mutagenez yöntemleri, EMS ve TMP / UV göstermektedir.
Abstract
Ultraviyole ışığı ile birlikte (TMP / UV) etil metan sülfonat (EMS) ve 4, 5 ', 8-Trimethylpsoralen: Bu protokol, laboratuvar ve nasıl iki alternatif yöntemler kullanarak onları mutagenize nematod korumak için prosedürler açıklanmaktadır. Nematodlar, çünkü kendinden gübreleme hermafroditlerde ve hayvan başına ahfadının yüzlerce üretebilir erkek oluşmaktadır basit vücut planı ve çiftleşme sistemi, genetik çalışmalar için güçlü bir biyolojik sistemler. Nematod, bakteri çim içeren agar plaklarına korunur ve kolay bir plakadan bir pick kullanarak başka bir transfer edilebilir. TMP / UV esas silmeler indükler EMS, nokta mutasyonları ve küçük delesyonlar ikna etmek için yaygın olarak kullanılan bir alkilleyici ajandır. Nematod kullanılan türlerin bağlı olarak, EMS ve TMP konsantrasyonları optimize edilmesi gerekecektir. Nematod Pristionchus pacificus resesif mutasyonlar izole etmek için, F2 nesil hayvanlar görsel fenotipleri için tarandı. Bu yöntemleri göstermek için, solucanlar mutagenized ve koordinasyonsuz (UNC), Dumpy (dpy) ve Trafo (Tra) mutantlar aradı.
Protocol
Discussion
Mutagenez çeşitli deneysel model organizmaların genetik çalışmalar için yaygın olarak istihdam edilen bir tekniktir. Mutagenez deneyler genellikle bir genin 2 işlevini tanımlamak için kullanılır. Pa sadece burada açıklanan mutagenez prosedürleri kullanılabilir pacificus değil, aynı zamanda C elegans ve ilgili diğer nematod türü. Burada iki yöntem, EMS ve TMP / UV mutagenez açıklar.
EMS genom 3,8 boyunca nokta mutasyonl…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu çalışma, NSF hibe İOK # 0615996 tarafından finanse edilmektedir.
Riferimenti
- Brenner, S. . Genetica. 77 (1), 71-71 (1974).
- Anderson, P. . Methods Cell Biol. 48, 31-31 (1995).
- Yandell, M. D., Edgar, L. G., Wood, W. B. . Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 91 (4), 1381-1381 (1994).
- Pires-daSilva, A. . WormBook. , 1-1 (2005).
- Kenning, C., Kipping, I., Sommer, R. . J. Genesis. 40 (3), 176-176 (2004).
- Sommer, R. J., Carta, L. K., Kim, S. Y. . Fundamental and Applied Nematology. 19 (6), 511-511 (1996).
- Pires-daSilva, A., Sommer, R. J. . Genes & development. 18 (10), 1198-1198 (2004).
- Wei, A., Yuan, A., Fawcett, G. . Nucleic acids research. 30 (20), 110-110 (2002).
- Jorgensen, E. M., Mango, S. E. . Nat Rev Genet. 3 (5), 356-356 (2002).
