Tillverkning, kalibrering och användning av icke-invasiv vibrerande prober för mätning av bioelektriska aktuella i olika biologiska system beskrivs.
Elektriska fält, som genereras av aktiv transport av joner, finns i många biologiska system och tjänar ofta viktiga funktioner i vävnader och organ. Till exempel spelar de en viktig roll i att leda cell migration vid sårläkning. Här beskriver vi tillverkning och användning av ultrakänslig vibrerande givare för att mäta extracellulära elektriska strömmar. Sonden är en isolerad, vass metalltråd med en liten platina-svart spets (30-35 mikrometer), som kan upptäcka jonströmmar i μA / cm 2 intervall i fysiologisk koksaltlösning. Sonden är vibrerat på ca 200 Hz med en piezoelektrisk Bender. I närvaro av en jonisk ström, upptäcker sonden en spänning skillnad mellan ytterligheterna av dess rörelse. Ett lås förstärkare filtrerar bort brus genom att låsa på sondens frekvensen av vibrationer. Data spelas in på datorn. Sonden är kalibrerad i början och slutet av experiment i lämpliga saltlösning, med hjälp av en kammare som gäller en ström på exakt 1,5 μA / cm 2. Vi beskriver hur man gör sonder, ställa in systemet och kalibrera. Vi visar också tekniken att hornhinnan mätning, och visar några representativa resultat från olika prover (hornhinna, hud, hjärna).
Vi beskriver en låg kostnad, grundläggande, men mycket känslig vibrerande sond system för att mäta icke-invasivt elektrisk ström i olika biologiska system.
Eventuella ändringar
Applikationer
Vi har använt den vibrerande sond för att mäta elektrisk ström i…
The authors have nothing to disclose.
Vi är tacksamma till professor Richard Borgens, Centrum för Förlamning forskning, Purdue University, för hjälp med montering av vibrerande sond systemet. Denna studie stöddes av NEI bevilja NIH 1R01EY019101 till MZ och BR, dels genom anslag från California Institute of regenerativ medicin RB1-01.417, NSF MCB-0.951.199 och med ett obegränsat Grant från Forskning kring att förebygga blindhet, UC Davis oftalmologi.
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Eligoy-Stainless Electrode | World Precision Instruments | SSM33A70 | 76 mm, 7 MΩ, 1-2μm tip | |
Gold R30 connector | www.vectorelect.com | R30 | Re-usable | |
Silver-loaded epoxy | 3M | SL65 | Mix 1-part Resin with 1-part Hardener | |
Dissecting microscope | Olympus | SZ40 | Magnification x6 to x40 | |
Potassium dicyanoaurate (KAu(CN)2) | Sigma-Aldrich | 379867 | CAUTION: Toxic | |
Chloroplatinic acid hydrate (H2PtCl6 x 6H2O) | Sigma-Aldrich | 520896 | CAUTION: Toxic | |
Lead(II) acetate trihydrate (Pb(CH3CO2)2 x 3H2O) | Sigma-Aldrich | 185191 | CAUTION: Toxic | |
Nano-Amp power source | Made in-house | – | Powered by six 1.5 V (AAA) batteries | |
3-dimensional micro-positioner | Line Tool Co. | Model H | ||
Lock-in amplifier | Stanford Research Systems | SR530 | ||
Digital I/O interface | National instruments | PCI-6220 | ||
Shielded Connector Block with BNC connections | National instruments | BNC-2110 | ||
Strathclyde Electrophysiology Software | University of Strathclyde Institute of Pharmacy and Biomedical Sciences, UK | WinWCP V4.1.5 | Free download from: http://spider.science.strath.ac.uk/sipbs/software_ses.htm | |
Calibration Chamber | Made in-house | |||
Constant Current Calibrator | Vibrating Probe Company | Powered by one 9 V (PP3) battery |