La producción de extracto de embrión de pollo para el Cultivo de murino crestas de células neurales madre
Summary
Para cultivar las células troncales de la cresta neural (NCSC) in vitro, un medio especial (NCSCM) es necesario. Parte esencial de NCSCM es el extracto de embrión de pollo (CEE). Se describen las técnicas precisas para producir una cantidad al máximo de calidad en estado puro y de alta CEE, incluyendo detalles como el aislamiento, la maceración, la centrifugación, y los procesos de filtración.
Abstract
La cresta neural nace de la neuro-ectodermo durante la embriogénesis y persiste sólo temporalmente. Los primeros experimentos ya prueba de las células progenitoras pluripotentes a ser una parte integral de la cresta neural 1. Fenotípicamente, las células troncales de la cresta neural (NCSC) se definen por la vez que expresa p75 (bajo afín crecimiento de los nervios del receptor del factor, LNGFR) y SOX10 durante su migración desde la cresta neural, 2,3,4,5. Estas células progenitoras pueden diferenciarse en células musculares lisas, células cromafines, neuronas y células gliales, así como los melanocitos, cartílago y hueso 6,7,8,9. Para cultivar NCSC in vitro, un especial de madre de la cresta neural medio celular (NCSCM) se requiere 10. La parte más compleja de la NCSCM es la preparación del extracto de embrión de pollo (CEE), que representan una fuente esencial de los factores de crecimiento para el NCSC, así como para otros tipos de explantes neural. Otros ingredientes NCSCM lado CEE están disponibles comercialmente. La producción de CCE de laboratorio con equipamiento de serie es de gran importancia para conocer los detalles difíciles como el aislamiento, la maceración, la centrifugación, y los procesos de filtración. En este protocolo se describen las técnicas precisas para producir una cantidad al máximo de calidad en estado puro y de alta CEE.
Protocol
Discussion
Este protocolo se basa en modificaciones de los procedimientos que se han descrito en el pasado 10,11. Además de las publicaciones anteriores que aquí muestran los distintos pasos diferentes del proceso de ampliación más. Esto apoya el experimentador con detalles importantes asegurando los procedimientos correctos y los resultados fiables. Además, como el proceso de disección es una parte esencial de la extracción de Europa central y oriental se describe el procedimiento de toma de los embriones fuera …
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
El apoyo y asesoramiento de Markus Pajtler Bohrer y Robert fueron de gran valor para la visualización de este protocolo.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 11 days incubated chicken eggs | Sörries-Trockels Vermehrungszucht GmbH & Co.KG | |||
| Alcoholic disinfection spray | Schülke & Mayr GmbH | |||
| DMEMGlutamax | GIBCO Invitrogen | |||
| Syringe sterile (60 ml) | BD Biosciences | |||
| Tubes sterile (50; 15 ml) | Greiner Bio-One GmbH | |||
| Pipet tips sterile | Starlab GmbH | |||
| Hyaluronidase typeIV-S | Sigma-Aldrich | |||
| Milipore stericups sterile (0.45; 0.22 μl) | Fisher Scientific AG | |||
| Pipettes sterile (25; 10; 5 ml) | Greiner Bio-One GmbH | |||
| Centrifuge L5-50 | Rotor type Ti-45 |
Riferimenti
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