Il iperinsulinemico-euglicemico pinza è il "gold standard" per la valutazione dell'azione dell'insulina. L'insulina è infusa a velocità costante stimolo del glucosio. La quantità di glucosio esogeno infusa per contrastare questo calo è indice di sensibilità all'insulina. Ecco la procedura viene eseguita su un consapevole, ratto sfrenato.
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Articolo metodologico
Iperinsulinemico-euglicemico pinza nei topi
In questo articolo
Sommario
Abstract
Diabete di tipo 2 (T2D) è in rapido aumento della prevalenza. Caratterizzata da produzione di insulina sia inadeguata o l'impossibilità di utilizzare l'insulina prodotta, i risultati T2D a elevati livelli di glucosio nel sangue. Il "gold-standard" nel valutare la sensibilità all'insulina è un iperinsulinemico-euglicemico morsetto o clamp insulina. In questa procedura, l'insulina è infusa a velocità costante con una conseguente diminuzione del glucosio nel sangue. Per mantenere la glicemia ad un livello costante, glucosio esogeno (D50) viene infusa nella circolazione venosa. La quantità di glucosio infusa per mantenere l'omeostasi è indice di sensibilità all'insulina. Qui vi mostriamo la procedura di base morsetto in cronicamente cateterizzati, sfrenato, ratto cosciente. Questo modello consente al sangue di essere raccolte con lo sforzo minimo per l'animale. Dopo l'induzione dell'anestesia, un'incisione mediana è fatto e l'arteria carotide comune sinistra e destra della vena giugulare sono cateterizzati. Cateteri inseriti sono lavata con soluzione salina eparinizzato, poi esteriorizzato e protetto. Gli animali sono ammessi a recuperare per 4-5 giorni prima di esperimenti, con aumento di peso monitorati giornalmente. Soltanto gli animali che per ritrovare il peso pre-intervento i livelli vengono utilizzati per gli esperimenti. Il giorno dell'esperimento, i ratti sono digiunato e collegati a pompe contenente insulina e D50. Glucosio al basale è valutata dalla linea arteriosa ed utilizzato un punto di riferimento per tutto l'esperimento (euglicemia). In seguito a questo, l'insulina è infusa a velocità costante nella circolazione venosa. Per abbinare il calo di glucosio nel sangue, D50 è infusa. Se il tasso di infusione D50 è superiore al tasso di assorbimento, un aumento del glucosio si verificherà. Allo stesso modo, se il tasso è insufficiente per soddisfare tutta l'assorbimento di glucosio del corpo, una goccia si verificherà. Titolazione di glucosio continua fino a letture del glucosio stabili sono realizzati. I livelli di glucosio e la velocità di infusione del glucosio durante questo periodo stabili sono registrati e riportati. Risultati forniscono un indice di sensibilità all'insulina tutto il corpo. La tecnica può essere raffinato per soddisfare specifiche esigenze sperimentali. E 'ulteriormente migliorata con l'uso di traccianti radioattivi che possono determinare il tessuto specifico di insulina glucosio-stimolata così come tutta fatturato glucosio corpo.
Protocollo
R: cateterizzazione chirurgica di circolazione venosa e arteriosa
Parte 1: catetere arterioso e venoso Preparazione
- Tagliare 15 cm di PE-50 (diametro interno di 0,58 millimetri (0,023 ") x un diametro esterno di 0,965 millimetri (0,038"). Tagliare una sezione di tubo silastic 1 millimetro (0,76 mm (0.030 ") di diametro interno x 1,65 millimetri (0,065 ") di diametro esterno) per l'utilizzo come contenimento tallone. Il contenimento tallone impedisce al ratto di tirare fuori il catetere una volta che è a posto.
- Inserire la punta delle micro dissettore nel lume del cordone frenare dolcemente e tenere le punte della pinza a....
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Discussione
Inizialmente sviluppato per l'indagine della sensibilità all'insulina negli esseri umani, la procedura di clamp è stato adattato ad altre specie tra cui ratti e topi di laboratorio. Modelli animali di accertamento della resistenza all'insulina fornisce un aiuto importante nella comprensione della fisiopatologia della sensibilità all'insulina e le patologie associate, nonché l'individuazione di interventi terapeutici che possiedono 1,2 clinico valore. Diversi metodi per valutare la sensibil.......
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Dichiarazioni
Procedure sono state approvate dalla University of Animal Care Calgary e Usa Comitato e rispettare l'Associazione canadese per le linee guida Animal Science Laboratory per la sperimentazione. Gli autori non hanno interessi in conflitto o divulgazioni.
Ringraziamenti
Questo studio è stato sostenuto dal Canadian Institutes of Health Research e Genome Canada.JS detiene premi stipendio il sostegno della ricerca sul patrimonio Alberta Foundationfor medica, Heart and Stroke Foundation del Canadaand Diabetes Association canadese. Un ringraziamento speciale a David Wasserman e Bracy Bingle per insegnare questa procedura per il laboratorio di Shearer.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Nome del reagente | Azienda | Numero di catalogo | Commenti (opzionale) |
| Tubi in polietilene Intramedic (PE-50) | Fisher Scientific | 14-170-12B | Diametro interno di 0,58 millimetri (0,023 ") x diametro esterno di 0,965 millimetri (0,038") |
| Dow Corning Silastic Laboratorio Tubi | Fisher Scientific | 11-189-15C | Diametro interno di 0,76 millimetri (0.030 ") x diametro esterno di 1,65 millimetri (0.065") |
| Tygon S-50-HL Medical Tubing | Harvard Apparatus | PY2 72-1251 | Diametro interno di 3,2 mm (0.125 ") x diametro esterno di 4,7 millimetri (0,1875") |
| Loctite Super Glue | Grand & Toy | 32237 | Gel di controllo |
| Sterile lama chirurgica | VWR | BD371610 | |
| Curve Pinza Micro Dissezione | George Tiemann & Co. | 160-20 | x 2 |
| Dissettore dritto Micro | George Tiemann & Co. | 160-15 | x 2 |
| Emostatica curve | George Tiemann & Co. | 105-1135 | x 2 |
| Emostatica retta | George Tiemann & Co. | 105-1130 | x 2 |
| Emostatica Suggerimento Guardie | Robbins Instruments, Inc. | 15.09-2-004 | |
| Forbici Chirurgia dritto | George Tiemann & Co. | 105-402 | |
| VENOJECT Multi-Sample adattatore Luer | Terumo Medical Products | 810127A | 21 gauge, 1 pollici |
| Catetere introduttore sterile | Becton Dickinson | 406999 | |
| 14-gauge Blunt | Becton Dickinson | 511310 | Calibro 14, 2 in |
| Sterile sutura chirurgica | Johnson & Johnson Medical Products | 1679H | Seta, dimensioni 3-0 |
| Non sterili sutura chirurgica | Angiotech Pharmaceuticals, Inc. | SP116 | Seta, dimensioni 4-0 |
| Tamponi di cotone | VWR | 10806-005 | |
| Garze 4ply | VWR | CA43845-062 | |
| Clippers animali piccola batteria | Harvard Apparatus | 729063 | |
| Isoflurano | Halocarbon Products Corp. | IPN-45 | |
| Anestetico carrello | Benson Medical Industries, Inc. | ||
| 70% di etanolo | Fisher Scientific | HC-1000 | |
| Betadine soluzione antisettica | Occidentale Drug Distribution Centre Ltd. | 105267 | |
| Modello 11 Plus pompa a siringa | Harvard Apparatus | 702208 | |
| Tubi in acciaio inossidabile Accoppiatori | Harvard Apparatus | 72-4434 | 23 gauge, 0,3 pollici |
| Tubi acciaio inossidabile Spine | Harvard Apparatus | 72-4436 | 23 gauge, 0,5 pollici |
| Acciaio Blunt Needles | Instech Laboratories, Inc. | LS22 | 22 gauge |
| 60 gradi Y-Connettori | Parti piccole | STCY-22-05 | 22 gauge |
| CritSpin Micro-ematocrito Centrifuga | Iris Sample Processing | CS12 | |
| Centrifuga Mini | Fisher Scientific | 05-090-100 | |
| Tubi Centrifuga Micro | VWR | 53550-778 | |
| Centrifuga in polipropilene da 50 ml tubi | VWR | 89004-364 | |
| 1 ml di plastica di slittamento Suggerimento Siringhe | Becton Dickinson | 309602 | |
| 3ml di plastica Luerlok Suggerimento Siringhe | Becton Dickinson | 309585 | |
| Anticoagulante iniezione di eparina | Occidentale Drug Distribution Centre Ltd. | 102824 | Produttore: LEO Pharma Inc. Conc. 1000 UI |
| Soluzione EDTA | Promega Corp. | V4231 | 0,5 M, pH 8,0 |
| Salino | Occidentale Drug Distribution Centre Ltd. | ABB7983154 | Produttore: cloruro di sodio Hospira 0,9% |
| 50% di destrosio | Vétoquinol | 8DEX012D | |
| Humulin-R | Eli Lilly | HI-210 | 100U/ml |
| Siringhe da insulina da 1 ml | Becton Dickinson | 309311 | |
| Fisherbrand * emato-Seal Sigillante | Fisher Scientific | 02-678 | |
| Fisherbrand * microematocrito tubi capillari | Fisher Scientific | 22-362-574 | |
| Strisce reattive One Touch Ultra | LifeScan, Inc. | AW 085-314H | |
| One Touch Ultra Sangue glucometro | LifeScan, Inc. | AW 085-314 ter | |
| Sodio Pentobarbitol | Ceva Sante Animale | 1715 138 | Conc. 54.7mg/ml |
| Laboratorio Etichettatura nastro rosso | VWR | 89097-932 | |
| Laboratorio nastro blu Etichettatura | VWR | 89097-936 | |
| Pesare Scala | Fisher Scientific | 01-913-88 | |
| Vortice | VWR | 58815-234 | |
| Timer | VWR | 62344-641 |
Riferimenti
- Halseth, A. E., Bracy, D. P., Wasserman, D. H. Limitations to basal and insulin-stimulated skeletal muscle glucose uptake in the high-fat-fed rat. Am J Physiol Endocrinol Metab. 279, E1064-E1071 (2000).
- Halseth, A. E., Bracy, D. P., Wasserman, D. H.
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Ristampe e permessi
