Bilinçli Rat hiperinsülinemik öglisemik Kelepçe
Summary
Hiperinsülinemik öglisemik kelepçe insülin eylem değerlendirmesi için "altın standart". İnsülin, glukoz alımını teşvik sabit bir hızla doluyor. Bu düşüşün karşı aşılanmış eksojen glukoz miktarı insülin duyarlılığını göstermektedir. İşte prosedür bilinçli bir dizginlenmemiş sıçan yapılır.
Abstract
Tip 2 diyabet (T2D) prevalansı hızla artıyor. Yetersiz insülin üretimi ya da yüksek kan glikoz düzeyleri insülin üretilen T2D sonuçları yararlanmak için yetersizlik ile karakterizedir. Insülin duyarlılığı değerlendirilmesinde "altın standart" bir hiperinsülinemik öglisemik kelepçe veya insülin kelepçe. Bu prosedürde, insülin, kan şekeri bir düşüş sonucunda sabit bir hızla doluyor. Kan şekeri sabit bir seviyede korumak için, eksojen glikoz (D50) venöz dolaşıma demlenir. Homeostazı korumak için aşılanmış glikoz miktarı insülin duyarlılığını göstermektedir. Burada, kronik kateterize dizginlenmemiş, bilinçli sıçan, temel kelepçe prosedürü göstermektedir. Bu model, hayvana en az stres ile kan toplanmasına izin verir. Anestezi indüksiyonu takiben, orta hat kesi yapılır ve sol karotis arter ve sağ juguler ven kateterize. Eklenen sonra exteriorized ve güvenli bir kateter heparinli serum fizyolojik ile temizlendi. Hayvanlar günlük olarak takip kilo alımı, deneyler için 4-5 gün önce kurtarmak için izin verilir. Sadece, ameliyat öncesi seviyelere ağırlığı yeniden bu hayvanların deneyler için kullanılır. Deney günü, sıçan, oruç tuttuklarını ve insülin ve D50 içeren pompalara bağlı. Temel glikoz arteriyel hattan değerlendirildi ve deney (euglycemia) boyunca bir kriter kullanılır. Bunu takiben, insülin venöz dolaşıma sabit bir hızla doluyor. Damla kan şekeri maç için, D50 demlenir. D50 infüzyon hızı alımını oranından daha büyükse, glikoz bir artış meydana gelecektir. Benzer şekilde, bu oran tüm vücut glukoz alımı maç için yetersiz ise, bir düşüş meydana gelecektir. Istikrarlı şekeri elde edilir kadar glikoz Titrasyon devam ediyor. Bu istikrarlı döneminde kan şekeri düzeyleri ve glukoz infüzyon oranları kaydedilir ve raporlanır. Sonuçlar tüm vücut insülin duyarlılığı bir dizin sağlar. Bu teknik spesifik deneysel gereksinimlerini karşılamak için rafine edilebilir. Bu doku spesifik insülin ile uyarılmış glukoz alımı yanı sıra tüm vücut glukoz ciro belirleyebilirsiniz radyoaktif izleyiciler tarafından daha da geliştirilmiştir.
Protocol
Discussion
Başlangıçta insanlarda insülin duyarlılığı araştırılması için geliştirilmiş, kelepçe prosedürü şimdi laboratuvar sıçan ve fareler de dahil olmak üzere diğer türler adapte edilmiştir. Insülin direncinin araştırılması hayvan modellerinde insülin hassasiyeti ile ilgili patolojiler patofizyolojisi anlamanın yanı sıra klinik değeri 1,2 olan terapötik girişimlerin belirlenmesi önemli bir yardım sağlar. Hayvanlarda insülin duyarlılığını değerlendirmek için çeşitli y?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu çalışma Kanada Sağlık Araştırma ve Genom Canada.JS Enstitüleri tarafından desteklenen Alberta Mirası Foundationfor Tıbbi Araştırma, Kalp ve İnme Vakfı Canadaand Kanada Diyabet Derneği maaş desteği ödül tutar. Dr David Shearer laboratuar için bu yordamı öğretim Wasserman ve Bingle Bracy özel teşekkürler.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| Intramedic Polyethylene Tubing (PE-50) | Fisher Scientific | 14-170-12B | Internal diameter of .58mm (.023″) x Outer diameter of .965mm (.038″) |
| Dow Corning Silastic Laboratory Tubing | Fisher Scientific | 11-189-15C | Internal diameter of .76mm (0.030″) x Outer diameter of 1.65mm (0.065″) |
| Tygon S-50-HL Medical Tubing | Harvard Apparatus | PY2 72-1251 | Internal diameter of 3.2mm (0.125″) x Outer diameter of 4.7mm (0.1875″) |
| Loctite Super Glue | Grand & Toy | 32237 | Gel Control |
| Sterile Surgical Blade | VWR | BD371610 | |
| Curved Micro Dissecting Forceps | George Tiemann & Co. | 160-20 | x 2 |
| Straight Micro Dissecting Forceps | George Tiemann & Co. | 160-15 | x 2 |
| Curved Hemostat | George Tiemann & Co. | 105-1135 | x 2 |
| Straight Hemostat | George Tiemann & Co. | 105-1130 | x 2 |
| Hemostat Tip Guards | Robbins Instruments, Inc. | 15.09-2-004 | |
| Straight Surgery Scissors | George Tiemann & Co. | 105-402 | |
| VENOJECT Multi-Sample Luer Adapter | Terumo Medical Products | 810127A | 21 guage, 1 in. |
| Sterile Catheter Introducer | Becton Dickinson | 406999 | |
| 14-gauge Blunt Needle | Becton Dickinson | 511310 | 14 guage, 2 in. |
| Sterile Surgical Suture | Johnson & Johnson Medical Products | 1679H | Silk, size 3-0 |
| Non-Sterile Surgical Suture | Angiotech Pharmaceuticals, Inc. | SP116 | Silk, size 4-0 |
| Cotton Swabs | VWR | 10806-005 | |
| 4ply Gauze Pads | VWR | CA43845-062 | |
| Small Animal Cordless Clippers | Harvard Apparatus | 729063 | |
| Isoflurane | Halocarbon Products Corp. | IPN-45 | |
| Anesthetic Cart | Benson Medical Industries, Inc. | ||
| 70 % Ethanol | Fisher Scientific | HC-1000 | |
| Betadine Antiseptic Solution | Western Drug Distribution Centre Ltd. | 105267 | |
| Model 11 Plus Syringe Pump | Harvard Apparatus | 702208 | |
| Stainless Steel Tubing Couplers | Harvard Apparatus | 72-4434 | 23 gauge, 0.3 in. |
| Stainless Steel Tubing Plugs | Harvard Apparatus | 72-4436 | 23 gauge, 0.5 in. |
| Stainless Steel Blunt Needles | Instech Laboratories, Inc. | LS22 | 22 gauge |
| 60 Degree Y-Connectors | Small Parts | STCY-22-05 | 22 gauge |
| CritSpin Micro-hematocrit Centrifuge | Iris Sample Processing | CS12 | |
| Mini Centrifuge | Fisher Scientific | 05-090-100 | |
| Micro Centrifuge Tubes | VWR | 53550-778 | |
| 50ml polypropylene centrifuge tubes | VWR | 89004-364 | |
| 1ml Plastic Slip Tip Syringes | Becton Dickinson | 309602 | |
| 3ml Plastic Luerlok Tip Syringes | Becton Dickinson | 309585 | |
| Heparin Anticoagulant Injection | Western Drug Distribution Centre Ltd. | 102824 | Manufacturer: LEO Pharma Inc. Conc. 1000 IU |
| EDTA Solution | Promega Corp. | V4231 | 0.5 M, pH 8.0 |
| Saline | Western Drug Distribution Centre Ltd. | ABB7983154 | Manufacturer: Hospira 0.9% Sodium Chloride |
| 50% Dextrose | Vetoquinol | 8DEX012D | |
| Humulin-R | Eli Lilly | HI-210 | 100U/ml |
| 1ml Insulin Syringes | Becton Dickinson | 309311 | |
| Fisherbrand* Hemato-Seal Sealant | Fisher Scientific | 02-678 | |
| Fisherbrand* Microhematocrit Capillary Tubes | Fisher Scientific | 22-362-574 | |
| One Touch Ultra Test Strips | LifeScan, Inc. | AW 085-314H | |
| One Touch Ultra Blood Glucose Meter | LifeScan, Inc. | AW 085-314B | |
| Sodium Pentobarbitol | Ceva Sante Animale | 1715 138 | Conc. 54.7mg/ml |
| Red Laboratory Labeling Tape | VWR | 89097-932 | |
| Blue Laboratory Labeling Tape | VWR | 89097-936 | |
| Weigh Scale | Fisher Scientific | 01-913-88 | |
| Vortex | VWR | 58815-234 | |
| Timer | VWR | 62344-641 |
Riferimenti
- Halseth, A. E., Bracy, D. P., Wasserman, D. H. Limitations to basal and insulin-stimulated skeletal muscle glucose uptake in the high-fat-fed rat. Am J Physiol Endocrinol Metab. 279, E1064-E1071 (2000).
- Halseth, A. E., Bracy, D. P., Wasserman, D. H. Limitations to muscle glucose uptake due to high fat feeding. Am. J. Physiol. 279, E1064-E1071 (2000).
- Muniyappa, R., Lee, S., Chen, H., Quon, M. J. Current approaches for assessing insulin sensitivity and resistance in vivo: advantages, limitations, and appropriate usage. Am J Physiol Endocrinol Metab. 294, 15-26 (2008).
- Cho, H. Insulin resistance and a diabetes mellitus-like syndrome in mice lacking the protein kinase Akt2 (PKB beta). Science. 292, 1728-1731 (2001).
- Dubois, M. J. The SHP-1 protein tyrosine phosphatase negatively modulates glucose homeostasis. Nat Med. 12, 549-556 (2006).
- Pacini, G., Thomaseth, K., Ahren, B. Contribution to glucose tolerance of insulin-independent vs. insulin-dependent mechanisms in mice. Am J Physiol Endocrinol Metab. 281, 693-703 (2001).
- Herbach, N. Dominant-negative effects of a novel mutated Ins2 allele causes early-onset diabetes and severe beta-cell loss in Munich Ins2C95S mutant mice. Diabetes. 56, 1268-1276 (2007).
- Maeda, N. Diet-induced insulin resistance in mice lacking adiponectin/ACRP30. Nat Med. 8, 731-737 (2002).
- Potenza, M. A., Marasciulo, F. L., Tarquinio, M., Quon, M. J., Montagnani, M. Treatment of spontaneously hypertensive rats with rosiglitazone and/or enalapril restores balance between vasodilator and vasoconstrictor actions of insulin with simultaneous improvement in hypertension and insulin resistance. Diabetes. 55, 3594-3603 (2006).
- Ayala, J. E., Bracy, D. P., McGuinness, O. P., Wasserman, D. H. Considerations in the design of hyperinsulinemic-euglycemic clamps in the conscious mouse. Diabetes. 55, 390-397 (2006).
- Wasserman, D. H., Ayala, J. E., McGuinness, O. P. Lost in translation. Diabetes. 58, 1947-1950 (2009).
