Enregistrements à partir de cellules entières du cerveau d'adulte drosophile
Summary
Cette vidéo montre la procédure pour isoler cerveaux entiers de l'adulte de drosophile en préparation pour l'enregistrement à partir de neurones unique en utilisant la technologie standard de cellules entières. Il comporte des images de cellules GFP étiqueté et les neurones considérés lors de l'enregistrement.
Abstract
Dans cette vidéo, nous démontrons la procédure pour isoler cerveaux entiers de l'adulte de drosophile en préparation pour l'enregistrement de neurones isolés. Nous commençons par décrire la solution dissection et la capture des femelles adultes utilisés dans nos études. La procédure pour enlever tout le cerveau intact, y compris les deux lobes optiques, est illustrée. Dissection de la trachée recouvrant est également représentée. Le cerveau isolé est non seulement faible mais a besoin de soins spéciaux dans la manipulation à ce stade pour éviter d'endommager les neurones, dont beaucoup sont proches de la surface externe du tissu. Nous montrons comment un support spécial, nous avons développé est utilisé pour stabiliser le cerveau dans la chambre d'enregistrement. Un électrophysiologie installation standard est utilisé pour l'enregistrement à partir de neurones simples ou des paires de neurones. Une image fluorescente, vus au microscope d'enregistrement, d'une ligne de conduite GAL4 expression de la GFP (GH146) illustre comment les neurones de projection (PN) sont identifiés dans le cerveau vivant. Une grande puissance d'image Nomarski montre une vue d'un seul neurone qui est ciblé pour l'enregistrement de la cellule entière. Quand le cerveau est enlevé avec succès, sans dommages, la majorité des neurones sont spontanément actifs, le tir des potentiels d'action et / ou présentant spontanément entrée synaptique. Cette préparation in situ, dans lequel l'enregistrement de cellules entières de neurones identifiés dans l'ensemble du cerveau peut être combiné avec les manipulations génétiques et pharmacologiques, est un modèle utile pour explorer la physiologie cellulaire et la plasticité du système nerveux central adulte.
Protocol
Discussion
La préparation du cerveau isolés ensemble, nous illustrer dans cette vidéo permet une évaluation des mécanismes cellulaires qui sous-tendent l'excitabilité et la transmission synaptique dans les neurones identifiés, y compris ceux dans les voies de traitement olfactif, dans le cerveau adulte chez la drosophile (Gu et O Dowd, 2006). Cette approche est complémentaire à l'étude de l'activité neuronale dans le cerveau des adultes intacts Drosophila (Wilson et tous en 2004), dans une grande partie de la même manière à p…
Acknowledgements
Ce travail a été soutenu par une subvention du NIH NS27501 DKOD. Un appui supplémentaire pour ce travail a été fourni par une subvention du Programme HHMI professeur d'DKOD.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| #5 Foceps | Tool | FST by DUMONT | No. 11251-10 | Be careful, never damage the fine tips of forceps |
| Papain | Reagent | Worthington | 3126 | 20 U/ml activated by 1 mM L-cysteine |
| Dissecting microscope | SMZ-2B Model:C-PS | Nikon | Equipped with gooseneck fiber optic lights positioned a low angle | |
| Needle & Syringe | PrecisionGlide®?, Becton Dickinson & Co | 305175 & 309602 | Cheap and durable | |
| Upright microscope | Axioskop2 FS plus | Zeiss | Equipped with a fixed stage, 40X water immersion objective, Nomarski optics, and fluorescent lamp | |
| Patch clamp amplifier | 200 B | Molecular device | ||
| Digidata D-A converter | 1322A | Molecular device |
Riferimenti
- Gu, H., O Dowd, D. K., K, D. Cholinergic synaptic transmission in Adult Drosophila Kenyon cells in situ. Journal of Neuroscience. 26, 265-272 (2006).
- Wilson, R. I., Turner, G. C., Laurent, G. Transformation of olfactory representations in the Drosophila antennal lobe. Science. 303, 366-370 (2004).
