Cargando Drosophila terminales nerviosas con indicadores de calcio
Summary
El calcio es un mensajero en todas partes en el sistema nervioso, esencial para desencadenar la liberación de neurotransmisores y los cambios en la fuerza sináptica. Aquí se demuestra una técnica para la carga de Ca 2 +-los indicadores en las terminaciones nerviosas de Drosophila. También demuestran la fabricación de los aparatos necesarios y hacer hincapié en los puntos críticos para el éxito de la técnica.
Abstract
El calcio juega muchos papeles en el sistema nervioso, pero ninguno tan impresionante que, como el detonante de la liberación de neurotransmisores, y ninguno más profundo que el mensajero fundamental para la plasticidad sináptica que apoya el aprendizaje y la memoria. Para aclarar aún más los fundamentos moleculares de Ca 2 +-dependiente de los mecanismos sinápticos, un modelo de sistema se requiere que sea genéticamente maleable y accesible fisiológicamente. Drosophila melanogaster ofrece este modelo. En este sistema, genéticamente codificados indicadores fluorescentes están disponibles para detectar cambios de Ca 2 + en las terminaciones nerviosas. Sin embargo, estos indicadores han limitado la sensibilidad a Ca 2 + y, a menudo muestran una respuesta no lineal. De índices sintéticos fluorescentes son más adecuados para la medición de la rapidez de Ca 2 + cambios asociados con la actividad nerviosa. Aquí se demuestra una técnica para la carga de dextrano conjugado sintético Ca 2 + indicadores en las terminaciones nerviosas en vivo en larvas de Drosophila. Se hace especial hincapié en aquellos aspectos del protocolo más crítico para el éxito de la técnica, tales como la forma de evitar descargas de electricidad estática a lo largo de los nervios aislados, mantener la salud de la preparación durante los períodos de carga extendida, y asegurar la supervivencia de los axones, proporcionando Ca 2 + para promover el sellado de las terminaciones del axón cortado. De baja afinidad dextrano conjugado con Ca 2 +-indicadores, como la fluo-4 y Rhod, están disponibles, que muestran una alta relación señal-ruido, mientras que mínimamente interrumpir presináptica Ca 2 + dinámica. Dextrano-conjugación ayuda a prevenir la Ca 2 + indicadores que se están secuestradas en orgánulos como las mitocondrias. La técnica de carga se puede aplicar igualmente a las larvas, embriones y adultos.
Protocol
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Schneider’s Insect Medium | Reagent | Sigma | S0146 | must contain L-glutamine and calcium |
| L-glutamic acid monosodium salt hydrate | Reagent | Sigma | G1626 |
Riferimenti
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