치킨 청각 Brainstem 슬라이스의 준비 및 문화
Summary
닭고기 청각 brainstem는 binaural 사운드 처리에 대한 책임 핵으로 구성되어 있습니다. 교양 접근, 분자 세포 및 네트워크 수준에서의 연결 구조와 청각 기능의 발달을 연구하기 위해 특별한 준비를 제공하는 동안 하나의 코로나 슬라이스 준비는 전체 회로를 유지합니다.
Abstract
닭고기 청각 brainstem 널리 개발 1-4 신중 기간에서뿐만 5-7 중추 신경 시스템에서 시간적 코딩을위한 메커니즘으로 청각 처리의 해부학과 생리학을 연구하는 데 사용되었습니다 잘 구축 모델 시스템입니다.
여기 급성 실험 절차 또는 장기 실험 조작에 대한 문화 organotypic 조각하는 데 사용할 수있는 닭고기 청각 brainstem의 조각을 준비하는 방법을 제시한다.
닭고기 청각 brainstem는 핵의 angularis, magnocellularis, laminaris 및 뛰어난 올리브로 구성되어 있습니다. 이 핵은 binaural 사운드 처리 및 단일 코로나 슬라이스 준비 전체 회로를 보존 책임이 있습니다. 궁극적으로, organotypic 슬라이스 문화는 시냅스 활동, 사전 및 postsynaptic 구성 요소의 표현, 부분 통제 흥분과 차별 유전자 발현의 표현과 같은 몇 가지 발달 매개 변수를 조작할 수있는 기회를 제공할 수 있습니다
이 접근법은 신경 회로 개발, 교양과 성숙에 대한 일반 지식을 확대하는 데 사용할 수 있습니다.
Protocol
1. 지역 분석 해 봅시다의 준비 95% O 2 / 5% CO 2의 혼합물 (7.2-7.4 사이의 산도, osmolarity 295-310 mOsm / L)와 함께 지속적으로 거품 인공 대뇌 척수 (ACSF). ACSF가 버블링이지만, 70 % EtOH로 작업 영역을 청소하십시오. vibratome과 깔끔히 칼날에도 청소. 증류수 (DH 2 O)의 칼날을 씻어. 적절한 해부 도구로 영역을 해부 깨끗한 유체 흡수 패드를 놓습니다. vibrato…
Discussion
몇 수십년 동안 치킨 brainstem의 급성 슬라이스 준비는 청각에게 처리 9, 10을 연구하는 데 사용되었습니다. 이러한 접근 방식은 모두 발달 및 성숙 상태 4, 11, 12 binaural 처리에에 – 체외 생리 어마어마한 양의 데이터를 제공하고 있습니다. 대부분이 고도로 전문화된 회로와 각 핵 소리 13, 14의 시간적 처리하는 역할에 대한 알려져있다. 사실,이 잘 특징 회로의 구조와 기…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
현재 및 이전 Rubel 연구소 회원.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Chicken ACSF | ||||
| NaCl | Fisher Scientific | M-11624 | 130 mM | |
| NaHCO3 | Fisher Scientific | M-10576 | 26 mM | |
| KCl | Sigma | P-9333 | 3 mM | |
| NaH2PO4 | Sigma | S-8282 | 1.25 mM | |
| Glucose | Sigma | G-7528 | 10 mM | |
| MgCl2 | Fisher Scientific | M33-500 | 1 mM | |
| CaCl2 | Acros Organics | 423525000 | 2 mM | |
| Chicken culture medium (store at 4°C) | ||||
| advanced minimum essential medium (with NEAA, sodium pyruvate at 110 mg/l, without L-glutamate) | Gibco Invitrogen | 12492-013 | 48.00% | |
| Earl’s balanced salt solution | Sigma | E-2888 | 24.00% | |
| L-glutamine (200 mM) | Sigma | G-7513 | 1.00% | |
| Glucose solution (200 g/l, sterile filtered) | Sigma | G-7528 | 2.75% | |
| horse serum (heat inactivated, sterile filtered) | Sigma | H-1138 | 24.00% | |
| Penicillin-streptomycin* | Sigma | P-0781 | 1.00 ml * = Add to 100 ml culture medium if needed to prevent contamination |
|
| Specific equipment | ||||
| Millicell-CM cell culture inserts | PICMORG50 | Millipore | ||
| 6-well plate | 6 Well Cell Culture Cluster | Corning Incorporated | ||
| Incubator | Forma Scientific CO2 Water Jacketed Incubator | Forma Scientific |
Riferimenti
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Citazione di questo articolo
Sanchez, J. T., Seidl, A. H., Rubel, E. W., Barria, A. Preparation and Culture of Chicken Auditory Brainstem Slices. J. Vis. Exp. (49), e2527, doi:10.3791/2527 (2011).