Kycklingen auditiva hjärnstammen består av atomkärnor ansvarig för binaural ljudbehandling. En enda koronalt skiva förberedelse upprätthåller hela kretsar medan de odlade metod ger en unik förberedelse för att studera utvecklingen av neuronala struktur och auditiv funktion på molekylär, cellulär och nätverk nivåer.
Kycklingen hörsel hjärnstammen är en väl etablerad modell system som har använts i stor utsträckning för att studera anatomi och fysiologi ljudbearbetning i diskreta perioder av utveckling 1-4 samt mekanismer för temporal kodning i det centrala nervsystemet 5-7.
Här presenterar vi en metod för att förbereda kyckling skivor auditiva hjärnstammen som kan användas för akut experimentella metoder eller att kultur organotypic skivor för långsiktiga experimentella manipulationer.
Kycklingen auditiva hjärnstammen består av kärnan angularis, magnocellularis, laminaris och överlägsen oliv. Dessa kärnor är ansvariga för binaural ljudbearbetning och ensamstående koronala förberedelser skiva bevara hela kretsen. I slutändan kan organotypic slice kulturer ger möjlighet att manipulera flera utvecklingsmässiga parametrar som synaptisk aktivitet, uttryck av pre-och postsynaptiska komponenter, uttryck för aspekter kontrollera retbarhet och differentierad genuttryck
Denna metod kan användas för att bredda den allmänna kunskapen om neural krets utveckling, förädling och mognad.
Under flera decennier har den akuta bit beredningen av kyckling hjärnstammen använts för att studera ljudbearbetning 9, 10. Detta tillvägagångssätt har gett en enorm mängd in vitro fysiologiska uppgifter om binaural behandling från både utvecklings-och mogna stater 4, 11, 12. Mycket är känt om detta mycket specialiserade krets och den roll varje kärna spelar i den temporala behandling av ljud 13, 14. I själva verket har kortsiktiga experimentella manipulationer och …
The authors have nothing to disclose.
Nuvarande och tidigare Rubel lab medlemmar.
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Chicken ACSF | ||||
NaCl | Fisher Scientific | M-11624 | 130 mM | |
NaHCO3 | Fisher Scientific | M-10576 | 26 mM | |
KCl | Sigma | P-9333 | 3 mM | |
NaH2PO4 | Sigma | S-8282 | 1.25 mM | |
Glucose | Sigma | G-7528 | 10 mM | |
MgCl2 | Fisher Scientific | M33-500 | 1 mM | |
CaCl2 | Acros Organics | 423525000 | 2 mM | |
Chicken culture medium (store at 4°C) | ||||
advanced minimum essential medium (with NEAA, sodium pyruvate at 110 mg/l, without L-glutamate) | Gibco Invitrogen | 12492-013 | 48.00% | |
Earl’s balanced salt solution | Sigma | E-2888 | 24.00% | |
L-glutamine (200 mM) | Sigma | G-7513 | 1.00% | |
Glucose solution (200 g/l, sterile filtered) | Sigma | G-7528 | 2.75% | |
horse serum (heat inactivated, sterile filtered) | Sigma | H-1138 | 24.00% | |
Penicillin-streptomycin* | Sigma | P-0781 | 1.00 ml * = Add to 100 ml culture medium if needed to prevent contamination |
|
Specific equipment | ||||
Millicell-CM cell culture inserts | PICMORG50 | Millipore | ||
6-well plate | 6 Well Cell Culture Cluster | Corning Incorporated | ||
Incubator | Forma Scientific CO2 Water Jacketed Incubator | Forma Scientific |