كيف محاريب والخلايا الجذعية خلال نموذج التنمية هو السؤال المهم مع الآثار العملية. في<em> ذبابة الفاكهة</em> المبيض ، والخلايا الجذعية الجرثومية الخط والشكل الجسدي مطلبهم خلال نمو اليرقات. هذا الفيديو يوضح كيفية تشريح ، وصمة عار وجبل المناسل الإناث من طور مرحلي third المتأخرة (LL3)<em> ذبابة الفاكهة</em> اليرقات.
العديد من الأجهزة تعتمد على الخلايا الجذعية من أجل تنميتها وخلال مرحلة التطور الجنيني للصيانة أو ترميم خلال فترة البلوغ. فهم كيفية تشكل الخلايا الجذعية ، وكيفية تفاعلها مع بيئتها ، من الأهمية بمكان لفهم التنمية ، التوازن والمرض. وقد عمل المبيض من melanogaster ذبابة الفاكهة ذبابة الفاكهة نموذجا للتفاعل مؤثر من الخلايا الجذعية الجرثومية خط (GSCs) مع دعم خلاياهم الجسدية (المتخصصة) 1 ، 2. وقد أتاح الموقع معروف من مكانة وGSCs ، ويقترن بالقدرة على معالجة وراثيا لهم والباحثين لتوضيح مجموعة متنوعة من التفاعلات بين الخلايا الجذعية ومطلبهم 12/03.
على الرغم من ثروة من المعلومات حول آليات مراقبة وصيانة GSC التمايز ، لا يعرف إلا القليل نسبيا حول كيفية GSCs مطلبهم والجسدية خلال نموذج التنمية. حوالي 18 محاريب الجسدية ، والتي تشمل المكونات الخلوية وخلايا شعيرات محطة كاب (الشكل 1) ، وشكل خلال طور مرحلي اليرقات third 13-17. GSCs تنشأ من خلايا جرثومية بدائية (PGCs). PGCs تتكاثر في مراحل اليرقات في وقت مبكر ، ولكن في أعقاب تشكيل مجموعة فرعية متخصصة ليصبح PGCs GSCs 7 ، 16 ، 18 ، 19. معا ، فإن الخلايا الجسدية وGSCs المتخصصة في جعل وحدة وظيفية التي تنتج البيض طوال فترة حياة الكائن الحي.
أسئلة كثيرة فيما يتعلق بتشكيل وحدة GSC تبقى دون جواب. وأفضل مثل عمليات التنسيق بين الخلايا السليفة للمحاريب والسلائف الخلايا الجذعية ، أو جيل من التباين داخل PGCs عندما تصبح GSCs ، يمكن دراستها في اليرقة. ومع ذلك ، دراسة منهجية للتنمية المبيض اليرقات يمثل تحديا جسديا. الأولى ، هي المبايض اليرقات الصغيرة. حتى في مراحل اليرقات أواخر هم فقط عبر 100μm. بالإضافة إلى ذلك ، المبيضين وشفافة هي جزء لا يتجزأ من الدهون في الجسم الأبيض. نحن هنا وصف بروتوكول خطوة بخطوة لعزل المبيضين من أواخر يرقات ذبابة الفاكهة طور مرحلي third (LL3) ، تليها تلطيخ مع الأضداد الفلورسنت. نحن نقدم بعض الحلول التقنية لمشاكل مثل تحديد المبيضين ، وتلطيخ وغسل الأنسجة التي لا تغرق ، والتأكد من أن الأجسام المضادة تخترق الأنسجة. ويمكن تطبيق هذا البروتوكول على مراحل في وقت سابق من اليرقات والخصيتين اليرقات كذلك.
هذا الفيديو يوضح عزلة والبروتوكول في الدقائق الاخيرة من تلطيخ المبيضين اليرقات طور مرحلي. لتنفيذ هذا البروتوكول بشكل روتيني وموثوق بها ، ينبغي إيلاء الانتباه إلى النقاط التالية :
The authors have nothing to disclose.
ويدعم الدردشة عن طريق منح ماري كوري إعادة الاندماج. وأيد هذا العمل من جانب إسرائيل لا علم منحة الصندوق. 1146-1108 ، من قبل هيلين ومارتن كيميل معهد أبحاث الخلايا الجذعية في معهد وايزمان للعلوم ، ومؤسسة Leir الخيرية.
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
NaCl | J.T.Baker | |||
Kcl | Merck | |||
CaCl2 | Sigma-Aldrich | |||
MgCl2 | Merck | |||
Sucrose | J.T.Baker | |||
Hepes | Sigma-Aldrich | |||
PBS | Sigma-Aldrich | |||
Triton X-100 | Sigma-Aldrich | |||
Albumin Bovine Fraction V | MP Biomedicals | 160069 | ||
Dumont biology tweezers 5 dumstar polished | FST Fine Science Tools | 11295-10 | ||
Nickel plated pin holder | FST Fine Science Tools | 26018-17 | ||
s.s minutien pins 0.1mm diam, 10mm long | FST Fine Science Tools | 26002-10 | ||
9 well plates 85X100 mm, 22mm o.d.x7mm deep | CORNING | 7220-85 | ||
Stereo Microscope MZ 16.5 with a standard transmitted light base TL ST | Leica | |||
6 well plates | Costar | 3516 | ||
Slides | Menzel Glaser GmbH | 798 | ||
Cover slips | Corning | 2940-223 | ||
Mounting media | Vectashield | H-1200 | ||
Cell strainer | Falcon | FAL352350 | ||
1B1 antibody | Developmental Studies Hybridoma Bank | |||
Anti-Traffic Jam | Laboratory of Dr. Dorothea Godt | |||
Anti-Vasa | Laboratory of Dr. Ruth Lehmann | |||
Anti β-Galactosidase | Cappel | |||
Secondary Antibodies | Jackson ImmunoResearch |