Vi har etableret en ny murine model af en hængende vægt system til portalen triade okklusion. Denne teknik kan være nyttig til fremtidige undersøgelser af iskæmi i murine hepatiske modeller.
Akut leverskade på grund af iskæmi, kan forekomme under flere kliniske procedurer, f.eks levertransplantation, levertumor resektion eller traumer reparation og kan resultere i leversvigt, som har en høj dødelighed 1-2. Derfor murine undersøgelser af hepatisk iskæmi er blevet en vigtig forskningsområde ved at give mulighed for at udnytte farmakologiske og genetiske undersøgelser 3-9. Konkret betingede mus med vævsspecifikke sletning af et gen (CRE, FLOX system) giver indsigt i den rolle af proteiner i bestemte væv 10-13. På grund af tekniske vanskeligheder forbundet med manuelt at klemme portalen Triaden i mus, udførte vi en systematisk evaluering under anvendelse af en hængende vægt for portal Triaden okklusion som tidligere er blevet beskrevet tre. Ved at bruge en hængende vægt system, placerer vi en sutur omkring den venstre gren af portalen triade uden at forårsage nogen skade på hepatiske lapper, da ogsåfineste klemmer tilgængelige, kan forårsage hepatisk vævsbeskadigelse på grund af den tætte placering af levervæv til beholderne. Endvidere er den højre gren af den hepatiske Triaden stadig perfunderet således ikke intestinal overbelastning forekommer med denne teknik, blodstrømmen til de rette hepatiske lapper bevares. Endvidere er portalen Triaden kun manipuleres, når hele kirurgiske procedure. Som et resultat heraf vil procedurer forbehandling med korte perioder med iskæmi og reperfusion, kan let udføres. Systematisk evaluering af denne model ved at udføre forskellige iskæmi og reperfusion gange afslørede en tæt korrelation mellem hepatisk iskæmi tid med leverskader, som målt ved alanin (ALT) og aspartat (AST) aminotransferaseniveauer serumniveauer 3,9. Taget sammen viser disse undersøgelser bekræfter yderst reproducerbar leverskade ved anvendelse af hængende vægt for hepatisk iskæmi og intermitterende reperfusion. Således kan denne teknik være nyttig til andre forskere interesseed i leveren iskæmi studier i mus. Derfor videoklippet giver en detaljeret trin-for-trin beskrivelse af denne teknik.
Den foreliggende undersøgelse beskriver en teknik til udførelse af iskæmi i en murin model ved hjælp af en ophængning vægt for okklusion af den venstre hepatiske portalen triade. Selvom det er en let metode til at lære følgende fælder bør tages i betragtning. En meget almindelig fejl i starten, er en dyb søm, der omfatter portal triaden og vena cava. Den vejrtrækning og puls vil bremse inden for 15 minutter som følge af øget modstand, og faldet i at vende tilbage blod til hjertet resulterer i en tidlig død af mus. Den bedste måde at forhindre, herunder af vena cava er at lokalisere vena cava, før sting ved at holde de rigtige lapper ned med en pincet. Et andet vigtigt spørgsmål er, at vægtene ikke er for tung, hvilket kan resultere i for meget stress på venstre og højre portal retssag, som også stopper blodtilførslen til de rigtige lapper. Er mængden af vand i Eppendorf hætteglas bør justeres til musen vægt og sOMMENDE indehavere skal placeres distalt fra søm placering. På den modsatte, hvis vægtene er til lavt blodtryk ikke helt standset. Begge fejl er let påviselig ved en yderligere farveændring til svagt af den højre lap eller utilstrækkelig farveændring af median-og venstre lapper, hhv. Derfor hepatiske farveændring efter anvendelse af vægte skal kontrolleres hver 10 minutter. En anden almindelig kirurgisk komplikation er beskadige af leveren med nålen. Derfor de rette fligene holdes nede med en mild pincet, således at spidsen af nålen let kan ses taget med en nåleholder. Hvis disse faldgruber i begyndelsen der tages højde for hanging-vægten for hepatisk iskæmi tilvejebringer en særdeles reproducerbar skade som følge af iskæmi ved at minimere variabilitet af leverskade i forbindelse med fastholdelse af portalen triade. Ved anvendelse af en hængende vægt system er portalen Triaden kun manipuleres, når helekirurgisk procedure, der forårsager signifikant mindre skade på de hepatiske lapper. Derudover forekommer der ikke lever eller tarm overbelastning med denne teknik. Mere vævstraume sker ved at fjerne og udskifte fartøjets klemmer, især med genanvendelse af klemmen i multiple iskæmi cyklusser som under iskæmisk prækonditionering. Anvendelse af hængende vægt, der er i et fjerntliggende sted fra levervæv ifølge vores observationer, tilvejebringer den fordel, pålidelige okklusion og samtidig forhindre vævstraume grund manipulation af leveren lapper ved genanvendelse af en klemme. Tilsammen den nuværende undersøgelse giver muligheden for ophængning vægt system til portalen treklang okklusion under iskæmi, minimere variabilitet og begrænsninger i forbindelse med fastspænding. Således denne teknik kunne være af interesse for andre forskere, der mener at studere hepatisk iskæmi.
The authors have nothing to disclose.
De foreliggende undersøgelser blev støttet af United States National Institutes of Health tilskud R01-HL092188, R01-DK083385 og R01HL098294, og Institut for Anæstesi Uddannelse og Forskning (FAER) Tilskud til HKE og DFG (Deutsche Forschungsgemeinschaft) Research Fellowship (GR2121/1- 1) og American Heart Association Grant til AG.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
Sodium Pentobarbital (Fatal Plus) | Vortech Pharmaceutical Ls, Ltd | V.P.L. 9372 | 4 mg/mL in saline |
Suture, Prolene 8.0 | Ethicon, USA | M8739 | reusable |
dissecting microscope | Leica | n/a | consider generous working distance |
Heating Table | Rt, Effenberger, Germany | n/a | only and single provider |
Surgical instruments | WPI, Dumont | Forceps, needle holder | |
Coagulator | Erbe, ICC50, Tuebingen, Germany | n/a | Different providers of coagulators |
Table 1. Specific reagents and equipment.