Isolamento e Cultura de Células-Tronco Adultas epitelial da pele humana
Summary
Uma maneira rápida e robusta de isolar células-tronco adultas viável epiteliais da pele humana é descrito. O método utiliza a digestão enzimática da matriz de colágeno da pele, seguido por arrancar dos folículos pilosos e isolamento de células em suspensão simples ou fragmentos de tecido para cultura de células.
Abstract
A homeostase de todos os tecidos auto-renovação é dependente das células-tronco adultas. Como células-tronco indiferenciadas sofrer divisões assimétricas, que geram células-filhas que mantêm o fenótipo de células-tronco e trânsito ampliando-cells (células TA) que migram do nicho de células-tronco, são submetidos a rápida proliferação e diferenciação terminal para repovoar o tecido.
Células-tronco epiteliais foram identificados na epiderme, folículo piloso, e intestino como células com alto potencial proliferativo in vitro e como o ciclismo slow-label de retenção de células in vivo 1-3. Adulto, tecido-específicos de células-tronco são responsáveis pela regeneração dos tecidos em que residem durante turnover fisiológico normal, assim como em épocas de estresse 4-5. Além disso, as células-tronco são geralmente consideradas como multi-potentes, possuindo a capacidade de dar origem a vários tipos de células dentro do tecido 6. Por exemplo, roedor cabelos células-tronco do folículo pode gerar epiderme, glândulas sebáceas e folículos pilosos 7-9. Nós mostramos que as células-tronco do humano região bojo folículo piloso apresentam potencialidade multi-10.
Células-tronco tornaram-se uma ferramenta valiosa na pesquisa biomédica, devido à sua utilidade como um sistema di vitro para estudar a biologia do desenvolvimento, diferenciação, tumorigênese e para a sua eventual utilidade terapêutica. É provável que células-tronco adultas do epitélio será útil no tratamento de doenças como displasias ectodérmicas, monilethrix, síndrome de Netherton, doença de Menkes, epidermólise bolhosa hereditária e alopecias 11-13. Além disso, outros problemas de pele, como queimaduras, feridas crônicas e úlceras irá beneficiar de terapias com células-tronco relacionadas 14,15. Dado o potencial para a reprogramação de células adultas em estado pluripotentes (células iPS) 16,17, as células adultas de fácil acesso e expansível-tronco na pele humana pode fornecer uma valiosa fonte de células para a indução e terapia a jusante de uma ampla gama de doenças, incluindo diabetes e doença de Parkinson.
Protocol
Discussion
Os métodos de extração de células e cultura descritos são surpreendentemente fáceis e reprodutíveis. Temos gerado culturas de células-tronco epiteliais de dezenas de indivíduos através de uma faixa etária ampla, incluindo pacientes com defeitos da pele herdado 18. É melhor para começar o processo no dia da colheita de tecidos, no entanto células permanecerá viável nos meios de comunicação sobre o gelo por vários dias, facilitando o transporte de noite, se necessário. Pele facelift descarta…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabalho é financiado pelo NIH / NCI conceder R01CA-118916
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM | GIBCO | 11995 | ||
| Hams F12 | GIBCO | 11765 | ||
| Fetal Bovine Serum (FBS) | GIBCO | 16000 | ||
| Insulin | GIBCO | 12585 | ||
| T3 | Sigma | T-2752 | ||
| Transferrin | Roche | 10652202001 | ||
| Hydrocortisone | Sigma | H-4001 | ||
| Cholera Toxin | Sigma | C8052 | ||
| Epidermal growth factor (EGF) | Sigma | E-9644 | ||
| Adenine | Sigma | A9795 | ||
| Trypsin(10X) | GIBCO | 15090 | ||
| VERSENE | GIBCO | 15040 | ||
| G418 Sulfate | Cellgro | 30-234-CR | ||
| Hanks’ Balanced Salt solution | Sigma | H6648 | ||
| 1X PBS | Cellgro | 21-040-CV | ||
| Mitomycin C | Roche | 10107409001 | ||
| Penicillin/streptomycin | Invitrogen | 15140122 | ||
| Dispase | Invitrogen | 17105 | ||
| Crystal Violet | Fisher | C581-25 |
Keratinocyte media (KCM)
[DMEM and Ham s F12 (GIBCO, 3:1), adenine (Sigma, 180 mM), 10% fetal bovine serum (GIBCO), cholera toxin (ICN, 0.1 nM), penicillin/streptomycin (GIBCO, 100 U/ml and 100 mg/ml, respectively), hydrocortisone (Sigma, 0.4 mg/ml, 1.1 mM), T/T3 (transferrin, GIBCO, 5 μg/ml, 649 nM; and triiodo-l-thyronine, Sigma, 2 nM), insulin (Sigma, 5 mg/ml, 862 nM), and EGF (Sigma, 10 ng/ml, 1.6 nM), pH 7.2]
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