En snabb, robust sätt att isolera livskraftiga vuxna epitelceller stamceller från mänsklig hud beskrivs. Metoden utnyttjar enzymatisk nedbrytning av hudens kollagen matrix, följt av plockning av hårsäckarna och isolering av enstaka cellsuspensioner eller fragment vävnad för cellodling.
Den homeostas av alla själv förnya vävnader är beroende av vuxna stamceller. Som odifferentierade stamceller genomgå asymmetrisk divisioner, genererar de dottern celler som behåller fenotyp stamceller och transit-förstärkning celler (TA celler) att migrera från stamceller nisch, genomgår en snabb spridning och obotligt differentiera att återbefolka vävnaden.
Epitelceller stamceller har identifierats i epidermis, hårsäckar och tarmar som celler med hög in vitro-proliferativ potential och som långsamt cykla etiketten behålla celler in vivo 1-3. Vuxen, vävnads-specifika stamceller ansvarar för regenerering av vävnader där de bor under normala fysiologiska såväl omsättning som under tider av stress 4-5. Dessutom är stamceller i allmänhet vara flera potent, som har förmågan att ge upphov till flera celltyper i vävnaden 6. Till exempel kan gnagare hårsäcken stamceller generera överhuden, talgkörtlar och hårsäckar 7-9. Vi har visat att stamceller från mänskliga hårsäcken bula regionen uppvisar flera potentialitet 10.
Stamceller har blivit ett värdefullt verktyg inom biomedicinsk forskning, på grund av deras nytta som ett in vitro-system för att studera utvecklingsbiologi, differentiering, Tumörgenesens och för deras eventuella terapeutiska nyttan. Det är troligt att vuxna epitelceller stamceller kommer att vara användbart vid behandling av sjukdomar som ektodermal dysplasier, monilethrix, Nethertons syndrom, Menkes sjukdom, ärftlig epidermolysis bullosa och alopeci 11-13. Dessutom kommer andra hudproblem såsom brännskador, kroniska sår nytta stamcellsrelalerad terapier 14,15. Med tanke på den potential för omprogrammering av vuxna celler till en pluripotenta tillstånd (iPS-celler) 16,17, får lättillgänglig och utbyggbart vuxna stamceller i huden hos människa ger en värdefull källa av celler för induktion och nedströms terapi för en mängd sjukdomar, inklusive diabetes och Parkinsons sjukdom.
Cellen utvinning och kultur beskrivna metoderna är förvånansvärt lättvindigt och reproducerbara. Vi har genererat epitelceller kulturer stamceller från dussintals av individer inom ett brett åldersintervall, inklusive patienter med ärftlig skalet 18. Det är bäst att starta processen på dagen för vävnaden skörd, men cellerna förblir livskraftiga i media på is i flera dagar, underlätta natten frakt om det behövs. Kasserade ansiktslyftning hud skördar hundratals livskraftiga äggblåsor för c…
The authors have nothing to disclose.
Detta arbete finansieras av NIH / NCI bevilja R01CA-118.916
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
DMEM | GIBCO | 11995 | ||
Hams F12 | GIBCO | 11765 | ||
Fetal Bovine Serum (FBS) | GIBCO | 16000 | ||
Insulin | GIBCO | 12585 | ||
T3 | Sigma | T-2752 | ||
Transferrin | Roche | 10652202001 | ||
Hydrocortisone | Sigma | H-4001 | ||
Cholera Toxin | Sigma | C8052 | ||
Epidermal growth factor (EGF) | Sigma | E-9644 | ||
Adenine | Sigma | A9795 | ||
Trypsin(10X) | GIBCO | 15090 | ||
VERSENE | GIBCO | 15040 | ||
G418 Sulfate | Cellgro | 30-234-CR | ||
Hanks’ Balanced Salt solution | Sigma | H6648 | ||
1X PBS | Cellgro | 21-040-CV | ||
Mitomycin C | Roche | 10107409001 | ||
Penicillin/streptomycin | Invitrogen | 15140122 | ||
Dispase | Invitrogen | 17105 | ||
Crystal Violet | Fisher | C581-25 |
Keratinocyte media (KCM)
[DMEM and Ham s F12 (GIBCO, 3:1), adenine (Sigma, 180 mM), 10% fetal bovine serum (GIBCO), cholera toxin (ICN, 0.1 nM), penicillin/streptomycin (GIBCO, 100 U/ml and 100 mg/ml, respectively), hydrocortisone (Sigma, 0.4 mg/ml, 1.1 mM), T/T3 (transferrin, GIBCO, 5 μg/ml, 649 nM; and triiodo-l-thyronine, Sigma, 2 nM), insulin (Sigma, 5 mg/ml, 862 nM), and EGF (Sigma, 10 ng/ml, 1.6 nM), pH 7.2]