Isolierung und Kultivierung von Adult epithelialen Stammzellen aus menschlicher Haut
Summary
Eine schnelle und robuste Lösung zur Isolierung von lebensfähigen Erwachsenen epithelialen Stammzellen aus menschlicher Haut beschrieben wird. Das Verfahren nutzt enzymatische Verdauung der Haut Kollagen-Matrix, durch Zupfen der Haarfollikel und Isolierung von einzelnen Zellsuspensionen oder Gewebestücke für die Zellkultur gefolgt.
Abstract
Die Homöostase aller selbst erneuernden Geweben ist abhängig von adulten Stammzellen. Als undifferenzierte Stammzellen asymmetrische Teilungen durchlaufen, erzeugen sie Tochterzellen, dass die Stammzellen Phänotyp und Transit-Verstärkung Zellen (TA-Zellen), die aus der Stammzell-Nische zu migrieren, zu unterziehen schnelle Verbreitung und terminal zu differenzieren, um das Gewebe besiedeln zu behalten.
Epitheliale Stammzellen in der Epidermis, Haarfollikel und Darm wurden als Zellen mit einem hohen In-vitro-proliferative Potential und so langsam-cycling-Label-Beibehaltung Zellen in vivo 1-3;. Adult-, Gewebe-spezifische Stammzellen sind verantwortlich für die Regeneration der Gewebe, in denen sie während des normalen physiologischen Umsatz als auch in Zeiten von Stress 4-5 befinden. Darüber hinaus sind Stammzellen allgemein als multi-potent, besitzen die Fähigkeit, die zu verschiedenen Zelltypen geben innerhalb der Gewebe 6. Zum Beispiel kann Nagetier Haarfollikelstammzellen generieren Epidermis, Talgdrüsen und Haarfollikel 7-9. Wir haben gezeigt, dass Stammzellen aus dem menschlichen Haarfollikel Wulstregion multi-Potential 10 weisen.
Stammzellen haben sich zu einem wertvollen Werkzeug in der biomedizinischen Forschung, die aufgrund ihrer Nützlichkeit als in vitro-System für das Studium der Entwicklungsbiologie, Differenzierung, Tumorentstehung und ihre möglichen therapeutischen Nutzen. Es ist wahrscheinlich, dass adulte epithelialen Stammzellen werden in der Behandlung von Krankheiten wie ektodermale Dysplasien, Monilethrix, Netherton-Syndrom, Menkes Krankheit erblich Epidermolysis bullosa und Alopezien 11-13 nützlich. Darüber hinaus werden andere Hautprobleme wie Brandwunden, chronische Wunden und Geschwüre aus Stammzellen verwandte Therapien 14,15 profitieren. Angesichts des Potenzials für Reprogrammierung von adulten Zellen in einen pluripotenten Zustand (iPS-Zellen) 16,17, kann die leicht zugänglich und erweiterbar adulten Stammzellen in der menschlichen Haut eine wertvolle Quelle von Zellen für die Induktion und Downstream-Therapie für ein breites Spektrum von Krankheiten, einschließlich bieten Diabetes und Parkinson-Krankheit.
Protocol
Discussion
Die Zelle Extraktion und Kultur Methoden beschrieben sind überraschend leicht und reproduzierbar. Wir haben epithelialen Stammzellen in Zellkulturen von Dutzenden von Menschen in einer breiten Altersspanne, einschließlich Patienten mit angeborenen Hautdefekte 18 erzeugt wird. Am besten ist es, den Prozess auf den Tag des Gewebes Ernte zu beginnen, jedoch Zellen bleiben in den Medien auf Eis tragfähig für mehrere Tage, die Erleichterung versand, wenn nötig. Ausrangierte Facelift Haut liefert Hunderte von …
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Diese Arbeit wird durch NIH / NCI gewähren R01CA-118916 gefördert
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM | GIBCO | 11995 | ||
| Hams F12 | GIBCO | 11765 | ||
| Fetal Bovine Serum (FBS) | GIBCO | 16000 | ||
| Insulin | GIBCO | 12585 | ||
| T3 | Sigma | T-2752 | ||
| Transferrin | Roche | 10652202001 | ||
| Hydrocortisone | Sigma | H-4001 | ||
| Cholera Toxin | Sigma | C8052 | ||
| Epidermal growth factor (EGF) | Sigma | E-9644 | ||
| Adenine | Sigma | A9795 | ||
| Trypsin(10X) | GIBCO | 15090 | ||
| VERSENE | GIBCO | 15040 | ||
| G418 Sulfate | Cellgro | 30-234-CR | ||
| Hanks’ Balanced Salt solution | Sigma | H6648 | ||
| 1X PBS | Cellgro | 21-040-CV | ||
| Mitomycin C | Roche | 10107409001 | ||
| Penicillin/streptomycin | Invitrogen | 15140122 | ||
| Dispase | Invitrogen | 17105 | ||
| Crystal Violet | Fisher | C581-25 |
Keratinocyte media (KCM)
[DMEM and Ham s F12 (GIBCO, 3:1), adenine (Sigma, 180 mM), 10% fetal bovine serum (GIBCO), cholera toxin (ICN, 0.1 nM), penicillin/streptomycin (GIBCO, 100 U/ml and 100 mg/ml, respectively), hydrocortisone (Sigma, 0.4 mg/ml, 1.1 mM), T/T3 (transferrin, GIBCO, 5 μg/ml, 649 nM; and triiodo-l-thyronine, Sigma, 2 nM), insulin (Sigma, 5 mg/ml, 862 nM), and EGF (Sigma, 10 ng/ml, 1.6 nM), pH 7.2]
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