망막 안료 상피 (RPE)는 단지 photoreceptors을 (막대 및 원뿔)이 들어있는 신경 망막, 아래, 포유 동물 눈의 뒤쪽에 자리잡고 있습니다. RPE는 밀접하게 그냥 위에있는 신경 망막과 색소 세포 cuboidal과 동료의 monolayer입니다. 이 협회는 망막 질환을 공부하고 연구하기 위해 큰 관심의 RPE를합니다. RPE는 상동 – 감독의 DNA 수리, P 유엔 분석의 생체내 분석에의 사이트입니다. 작은 크기로 인해 해부하다 (직경 3.5mm 정도)와 구면 모양 마우스 눈 특히 어렵습니다. 이 문서 상세 RPE의 전체 마운트에 발생하는 안구의 해부를위한 절차를 설명합니다. 이 절차에서는, 우리는 눈 구면 구조에 대해 함께보다는 일을하는 방법을 보여줍니다. 간단히, 결합 조직, 근육, 그리고 시신경이 안구의 뒤쪽에서 제거됩니다. 그런 다음, 각막과 렌즈가 제거됩니다. 다음 전략적 상처가 남아있는 조직의 중요한 평평화에 결과를 만들 수 있습니다. 마지막으로, 신경 망막은 부드럽게 여전히 기본 맥락막과 공막엔에 첨부되어 그대로 RPE를 공개, 해제 해제됩니다. 이 모든 마운트는 P 유엔 분석 또는 RPE 조직의 immunohistochemistry 또는 immunofluorescent 평가를 수행하는 데 사용할 수 있습니다.
Protocol
1. 눈 밖에서 관계없는 조직을 제거 35mm 접시의 뚜껑에 1X PBS 하거라. 수준은 뚜껑의 입술 아래에 있어야합니다. 35mm 접시에 저장 튜브에서 바로 포셉, 전송 아이 (들)을 사용합니다. 1 : 눈이 두 가지 이유로 PBS에 빠져들 수 있습니다. 당신이보고 쉽게 제거 2 수 있도록 외부 조직의 눈을 멀리 "떠"것입니다. 정지 상태에서 해부하는 동안 눈을 자연스럽게 당신은 반대보다는 이…
Discussion
RPE는 상동 – 감독 수리 생체내 분석에서 P 유엔 분석의 사이트입니다. P 유엔 분석은 상동 – 감독 수리의 주파수에서 다른 DNA의 손상의 효과 1,2 및 DNA 손상 신호 및 복구 유전자 3,4,5을 연구하는 데 사용되었습니다. 이 분석은 RPE 1 단일 셀 이벤트를 감지, 매우 민감합니다. 또한 개발 6 중 상동 – 감독 복구 이벤트의 타이밍의 차이를 감지…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 환경 건강 과학의 국립 연구소에 의해 지원되었다 [K22ES012264에 AJRB]와 미국 암 협회 InstitutionalResearch 그랜트 [ACS – IRG – 00 – 173-04] 조종사 projectaward [AJRB에]. 우리는하지 말아야 할 걸의 예를 들어, 원고 특히 비디오와 아담 브라운에 대한 의견의 중요한 독서에 대한 주교의 실험실의 구성원을 또한 감사드립니다. 우리는 우리에게 해부 비디오 촬영을위한 카메라 설정 그의 해부 범위 / 비디오의 사용을 허용을위한 Greehey 어린이 암 연구소의 박사 도널드 맥유언 감사합니다. 우리는 선명하게 우리의 microdissection 도구의 수리를 위해 코르테 악기에서 Daron 브라운 감사합니다.
Claybon, A., Bishop, A. J. R. Dissection of a Mouse Eye for a Whole Mount of the Retinal Pigment Epithelium. J. Vis. Exp. (48), e2563, doi:10.3791/2563 (2011).