Médula Espinal Electrofisiología II: Fabricación de electrodos de aspiración extracelular
Summary
Una demostración de la fabricación y el uso de un electrodo de succión extracelular para medir los registros electrofisiológicos de los cables de la columna vertebral de roedores recién nacidos<em> In vitro</em
Abstract
Desarrollo de circuitos neuronales y la locomoción pueden ser estudiados usando roedores recién nacidos la médula espinal centro generador de patrones (CPG) de comportamiento. Demostramos un método para la fabricación de electrodos de succión que se utilizan para examinar la actividad de GPC, o la locomoción ficticia, en los cables de roedores disecados espinal. Los cables de la columna vertebral de roedores se colocan en líquido cefalorraquídeo artificial y las raíces ventrales son atraídos hacia el electrodo de succión. El electrodo se construye mediante la modificación de un electrodo de succión disponible en el mercado. Un hilo de plata pesada se utiliza en lugar del cable estándar proporcionada por el electrodo en el comercio. La punta de vidrio del electrodo comercial se sustituye con una punta de plástico para mayor durabilidad. Preparamos la mano electrodos dibujados y electrodos hechos de tamaños específicos de tubos, lo que permite la consistencia y la reproducibilidad. Los datos se recopilaron mediante un amplificador y un software de adquisición de neurogram. Las grabaciones se realizaron en una mesa de aire dentro de una jaula de Faraday para evitar la interferencia mecánica y eléctrica, respectivamente.
Protocol
Discussion
Desarrollo del sistema nervioso pueden ser estudiados usando los cables aislados de roedores espinal. En presencia de los neurotransmisores, la locomoción ficticia puede ser generada a partir de la médula espinal en forma de patrones de actividad eléctrica 1,3. Estas explosiones rítmicas se producen en el 0,2 a 0,5 Hz y siguen el modelo de alternancia izquierda-derecha y flexor extensor. En diferentes etapas de desarrollo, la solidez y los patrones de esta actividad varía de 1. Las mutaciones …
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Samuel L. Pfaff es profesor en el Laboratorio de Expresión Génica en el Instituto Salk de Estudios Biológicos y un investigador en el Instituto Médico Howard Hughes. Este trabajo fue apoyado por el Christopher y Dana Reeve Foundation. Joe Belcovson, Schnoeker Kent y Mike Sullivan en Recursos Multimedia en el Instituto Salk proporcionó asistencia con la fotografía y la edición.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| PTFE Sub Lite Wall Tubing (Small tubing) | Zeus | 36AWG | 0.005”ID x 0.003” Wall (Small Parts) Also available in 0.003” to 0.006” | |
| Large tubing (0.86mm (0.34”)) | Clay Adams Brand Intramedic Becton Dickinson and Company | 427420 | 0.86mm (0.34”) O.D. 1.27mm (.050”) | |
| Electrode Barrel | A-M Systems | 573000 | ||
| Adhesive | JB Weld | |||
| Adhesive: Silicone caulk | ||||
| Solder and soldering iron | ||||
| Bleach | ||||
| Xylene | ||||
| Silver wire: 0.010” | A-M Systems | |||
| Insect pins: Austerlitz 0.1mm | Fine Science Tools | 26002-10 | ||
| Magnetic Stand | Narishige | GJ-8 | ||
| Micromanipulator | Narishige | MN 151 | ||
| Miniboard (Headstage) | Grass Industries | F-15EB/B1 | ||
| Polyview Adaptor Unit | Grass Industries | PVA 8 | ||
| Bipolar Portable Physiodata Amplifier System | Grass Industries | 15LT | ||
| ANALOG TO DIGITAL CARD | National Instruments | 6035E | ||
| Air Table; Vibraplane | Kinetic Systems |
Riferimenti
- Gallarda, B. W., Sharpee, T. O., Pfaff, S. L., Alaynick, W. A. Defining rhythmic locomotor burst patterns using a continuous wavelet transform. Ann N Y Acad Sci. 1198, 133-139 (2010).
- Meyer, A., Gallarda, B. W., Pfaff, S., Alaynick, W. Spinal cord electrophysiology. J Vis Exp. , (2010).
- Gallarda, B. W. Segregation of axial motor and sensory pathways via heterotypic trans-axonal signaling. Science. 320, 233-236 (2008).
- Landmesser, L. The development of motor projection patterns in the chick hind limb. J Physiol. 284, 391-414 (1978).
- Myers, C. P. Cholinergic input is required during embryonic development to mediate proper assembly of spinal locomotor circuits. Neuron. 46, 37-49 (2005).
- Chanin, M. The determination of chloride by use of the silver-silver chloride electrode. Science. 119, 323-324 (1954).
- Goulding, M. Circuits controlling vertebrate locomotion: moving in a new direction. Nat Rev Neurosci. 10, 507-518 (2009).
