Spinal Cord Elektrofysiologie II: Extracellulaire Suction Elektrode Fabrication
Summary
Een demonstratie van de fabricage en het gebruik van een extracellulair zuigkracht elektrode gebruikt om de elektrofysiologische opnamen van neonatale knaagdieren ruggenmerg te meten<em> In vitro</em
Abstract
Ontwikkeling van neurale schakelingen en bewegingsapparaat kunnen worden bestudeerd met behulp van pasgeborenen knaagdier ruggenmerg centrale patroon generator (CPG) gedrag. Demonstreren we een methode om de zuigkracht elektroden die worden gebruikt om CPG activiteiten te onderzoeken, of fictieve motoriek fabriceren, in ontleed knaagdieren ruggenmerg. Het knaagdier ruggenmerg worden geplaatst in kunstmatige cerebrospinale vloeistof en het ventrale wortels zijn getrokken in de aanzuig-elektrode. De elektrode wordt geconstrueerd door het wijzigen van een commercieel beschikbare zuig-elektrode. Een zwaardere zilveren draad wordt gebruikt in plaats van de standaard draad die door de handel verkrijgbare elektrode. Het glas tip op de commerciële elektrode is vervangen door een plastic tip voor verhoogde duurzaamheid. Wij bereiden de hand getekend elektroden en elektrodes gemaakt van specifieke maten van de buizen, waardoor de consistentie en reproduceerbaarheid. Gegevens worden verzameld met behulp van een versterker en neurogram acquisitie software. Opnames worden uitgevoerd op een lucht-tafel in een kooi van Faraday om mechanische en elektrische storingen respectievelijk te voorkomen,.
Protocol
Discussion
Ontwikkeling van het zenuwstelsel kan worden bestudeerd met behulp van geïsoleerde knaagdieren ruggenmerg. In aanwezigheid van neurotransmitters, kunnen fictieve voortbeweging worden gegenereerd uit het ruggenmerg in de vorm van een patroon elektrische activiteit 1,3. Deze ritmische uitbarstingen worden geproduceerd op 0,2 tot 0,5 Hz en zijn patroon in de links-rechts en de flexor-extensor afwisselingen. Op verschillende ontwikkelingsstadia, de robuustheid en de patronen van deze activiteit varieert 1.<…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Samuel L. Pfaff is een professor in de Gene Expression laboratoria in het Salk Instituut voor Biologische Studies en een onderzoeker in de Howard Hughes Medical Institute. Dit werk werd ondersteund door de Christopher Reeve Foundation en Dana. Joe Belcovson, Kent Schnoeker en Mike Sullivan in Multimedia Resources aan het Salk Institute hulp geboden met fotografie en bewerken.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| PTFE Sub Lite Wall Tubing (Small tubing) | Zeus | 36AWG | 0.005”ID x 0.003” Wall (Small Parts) Also available in 0.003” to 0.006” | |
| Large tubing (0.86mm (0.34”)) | Clay Adams Brand Intramedic Becton Dickinson and Company | 427420 | 0.86mm (0.34”) O.D. 1.27mm (.050”) | |
| Electrode Barrel | A-M Systems | 573000 | ||
| Adhesive | JB Weld | |||
| Adhesive: Silicone caulk | ||||
| Solder and soldering iron | ||||
| Bleach | ||||
| Xylene | ||||
| Silver wire: 0.010” | A-M Systems | |||
| Insect pins: Austerlitz 0.1mm | Fine Science Tools | 26002-10 | ||
| Magnetic Stand | Narishige | GJ-8 | ||
| Micromanipulator | Narishige | MN 151 | ||
| Miniboard (Headstage) | Grass Industries | F-15EB/B1 | ||
| Polyview Adaptor Unit | Grass Industries | PVA 8 | ||
| Bipolar Portable Physiodata Amplifier System | Grass Industries | 15LT | ||
| ANALOG TO DIGITAL CARD | National Instruments | 6035E | ||
| Air Table; Vibraplane | Kinetic Systems |
Riferimenti
- Gallarda, B. W., Sharpee, T. O., Pfaff, S. L., Alaynick, W. A. Defining rhythmic locomotor burst patterns using a continuous wavelet transform. Ann N Y Acad Sci. 1198, 133-139 (2010).
- Meyer, A., Gallarda, B. W., Pfaff, S., Alaynick, W. Spinal cord electrophysiology. J Vis Exp. , (2010).
- Gallarda, B. W. Segregation of axial motor and sensory pathways via heterotypic trans-axonal signaling. Science. 320, 233-236 (2008).
- Landmesser, L. The development of motor projection patterns in the chick hind limb. J Physiol. 284, 391-414 (1978).
- Myers, C. P. Cholinergic input is required during embryonic development to mediate proper assembly of spinal locomotor circuits. Neuron. 46, 37-49 (2005).
- Chanin, M. The determination of chloride by use of the silver-silver chloride electrode. Science. 119, 323-324 (1954).
- Goulding, M. Circuits controlling vertebrate locomotion: moving in a new direction. Nat Rev Neurosci. 10, 507-518 (2009).
