这个视频协议演示了如何真正的神经干细胞在一个混合使用的神经细胞集落形成细胞分析的神经前体细胞人口歧视和枚举。
神经球吸附试验(NSA)是最常用的方法,隔离开来,扩大,并计算出神经干细胞(NSCs)的频率之一。此外,本无血清培养系统也被扩大干细胞,并确定它们的频率从各种肿瘤和正常组织。最近,它已被证明,神经球的形成和神经干细胞之间不存在一个以一对一的关系。这表明,目前适用的国家安全局,高估了一个混合的人口从胚胎和成年哺乳动物大脑的神经前体细胞神经干细胞的频率。实际上该视频演示了一种新的胶原蛋白为基础的半固体含量,神经细胞集落形成细胞分析(N CFCA),它具有歧视基于其长期的增殖潜能的祖细胞的干的能力,从而提供了一种方法枚举国科会的频率。在N – CFCA殖民地≥2毫米,直径是来自细胞,满足了NSC的所有功能标准,而殖民地<2毫米祖细胞衍生。可用于从不同的来源,包括小学和培养成人或胚胎小鼠中枢神经系统的细胞准备细胞的N – CFCA程序。在这里,我们使用准备通过从胚胎14天小鼠大脑产生执行N – CFCA一个神经球的细胞。培养增殖培养基补充了三个星期,每7天允许镀细胞表现出充分的增殖潜能,然后神经祖和真正的神经干细胞的频率计数的菌落<2毫米数分别计算和那些在最初镀细胞数量≥2毫米。
虽然神经干检测3,1,2是最常用的方法,隔离和扩大像成人和胚胎的中枢神经系统组织的各种来源的神经干细胞,它不能准确地测量在混居的神经前体细胞的NSC频率(茎祖细胞),因为没有神经球的数量和真正的干细胞 4之间的一对一关系。为了解决这个限制,原国家安全局已被改编,让神经干细胞和祖细胞成长为三个星期5-7充分发挥其扩散能力。与液体NSA的不同的是,在N – CFCA殖民地实际上是克隆而得,半固态的胶原基质防止单细胞镀和菌落聚集的迁移。对于这个实验的结果一致,我们建议:
The authors have nothing to disclose.
这项工作是从Overstreet基金会的资金支持。
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
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NeuroCult NSC Basal Medium | Medium | STEMCELL | 05700 | |
NeuroCult NSC Proliferation Supplements | Medium supplement | STEMCELL | 05701 | |
NeuroCult NCFC medium | Medium | STEMCELL | 05720 | |
0.05% trypsin-EDTA | Reagent | Gibco | 25300-062 | |
Soybean trypsin inhibitor | Reagent | Sigma | T6522 | |
Cell strainer | Sieve | BD Falcon | 352340 | |
Pen/Strep | Reagent | Gibco | 15140-122 | |
T25 flask | Culture ware | Nalge Nunc international | 136196 | |
T80 flask | Culture ware | Nalge Nunc international | 178905 | |
Collagen | Reagent | STEMCELL | 04902 | |
EGF | Growth factor | R&D | 2028-EG | |
b-FGF | Growth factor | R&D | 3139-FB | |
Heparin | Growth factor | Sigma | H4784 | Reconstituted in PBS |
15 ml tubes | Culture ware | BD Falcon | 352096 | |
50 ml tubes | Culture ware | BD Falcon | 352070 | |
35 mm culture dishes | Culture ware | STEMCELL | 27100 | |
Gridded scoring dishes | Culture ware | STEMCELL | 27500 |