En metod beskrivs för att sprida mänskliga retinoblastom tumörer hos möss. Tumörceller direkt sprutas in i ögonen på immunförsvaret bristfällig möss. Sekundära tumörer har framgångsrikt etablerat med båda cellerna skördas från mänskliga tumörer och odlade tumorspheres.
Odling retinoblastom tumörceller i definierade medier stamceller ger upphov till primär tumorspheres som kan odlas och bibehållas under en begränsad tid. Dessa odlade tumorspheres kan uppvisa markant olika cellulära fenotyper jämfört med den ursprungliga tumörer. Demonstration att odlade celler har förmågan att bilda nya tumörer är viktigt att se till att odlade celler modell biologi den ursprungliga tumören.
Här presenterar vi ett protokoll för att sprida mänskliga retinoblastom tumörer in vivo på Rag2 – / – immuna bristfällig möss. Odlade mänskliga retinoblastom tumorspheres av låg passage eller celler från nyskördade mänskliga retinoblastom tumörer injiceras direkt in i glaskroppen hålrum murina ögon bilda tumörer inom 2-4 veckor. Dessa tumörer kan skördas och antingen ytterligare passerats i murina ögonen in vivo eller odlas som tumorspheres in vitro. Förökning har framgångsrikt genomförts för minst tre passager och därmed upprättat en fortsatt källa till mänsklig retinoblastom vävnad för ytterligare experiment.
Wesley S. Bond och Lalita Wadhwa är co-första författare.
Tekniken beskrivs underlättar tumörer förökning retinoblastom i deras intraokulära, intravitreal miljö. Den intraokulär injektion teknik har använts tidigare för att skapa tumörer från retinoblastom som härrör cellinjer 1 samt att leverera virala vektorer för intraokulär genterapi 2,3. Denna teknik har nu med framgång använts för att producera humant retinoblastom tumörer genom direkt injicering av celler från den primära tumören och injektion av tumorspheres samt serienummer utbredning av xenograft tumörer. Synliga tecken på tumörbildning (oftast leukocoria) är vanligtvis först noteras inom 4 veckor, varefter intraokulära blödningar och dilatation av världen och / eller vävnader som omger banan utvecklas inom 5-8 veckor. En minoritet av injicerat möss skada den injicerade ögat, vilket leder till permanent stängning av ögonlocken. I dessa fall är uttänjning det enda tecknet på tumörbildning.
Inrättande av murina xenograft tumörer har inte varit framgångsrika med alla mänskliga retinoblastom tumörer, men utbredning av etablerade xenograft tumörer är mycket framgångsrik. Denna observation tyder på att vissa egenskaper hos den primära tumören, som invasiv och nivå av differentiering eller någon annan okänd faktor, kan påverka möjligheterna för dessa tumörer för att överleva i murina okulär miljö.
Mängden vävnad som kan förvärvas från ett mänskligt retinoblastom tumören är ganska liten, och det finns stora begränsningar i förmågan till kultur mänskliga retinoblastom celler in vitro som begränsad livslängd, förlust av solida tumörer histologi och förändringar av de cellulära fenotyp. Detta protokoll är ett relativt enkelt sätt att sprida den mänskliga tumören och etablera en mus-modell av den mänskliga sjukdomen. Detta möjliggör ytterligare in vitro och in vivo-experiment i biologi retinoblastom och längre underhåll av tumören utanför patienten.
The authors have nothing to disclose.
Finansieringen för detta projekt är från Clayton Stiftelse för Forskning och näthinnan Research Foundation.
Name | Company | Catalog # | Comments |
---|---|---|---|
Phenylephrine HCl 2.5% | Bausch & Lomb | 053-11 | Ophthalmic solution |
30-ga Needle | BD | 305128 | Regular bevel |
10-mL Luer-Lock Syringe | BD | 309604 | |
3/10-cc Insulin Syringe | BD | 328431 | |
Alcohol swabs | BD | 326895 | |
6-Well Plate, Tissue Culture-Treated | BD | 353046 | |
Proparacaine HCl 0.5% | Butler AHS | 017239 | Ophthalmic solution |
Ketamine HCl 100mg/mL | Fort Dodge | 4402A | |
10-μL Hamilton Syringe | Hamilton Company | 7648-01 | |
32-ga Hamilton Needle | Hamilton Company | 7803-04 | Custom length – 0.5″ |
Neurobasal-A Media | Invitrogen | 10888-022 | |
B-27 Supplement Minus Vitamin A, 50X | Invitrogen | 12587-010 | |
RPMI-1640 Media | Mediatech | 10-040-CV | |
Non-essential Amino Acid Solution, 100X | Mediatech | 25-025-CI | |
L-Glutamine, 100X | Mediatech | 25-005-CI | |
Disposable #11 Scalpel | Miltex | 4-411 | |
Rodent Anesthesia Combo | n/a | n/a | In-house pharmacy formulation (ketamine 37.6 mg/mL, xylazine 1.92 mg/mL, acepromazine 0.38 mg/mL) |
Recombinant Human Epidermal Growth Factor (EGF) | STEMCELL Technologies | 02633 | Reconstitute at 10 μg/mL stock solution |
Recombinant Human Basic Fibroblast Growth Factor (bFGF) | STEMCELL Technologies | 02634 | Reconstitute at 10 μg/mL stock solution |
OMS-75 Operation Microscope | Topcon Medical Systems | OMS-75 | This model has been discontinued |
10% Formalin | VWR | 95042-908 |