Grubumuz, kardiyovasküler sistem fizyolojik pulsatil gerilmeler implante küçük çaplı vasküler greft yeniden taklit eden bir biyoreaktör kültür sistemi geliştirmiştir.
Fonksiyonel küçük çaplı arteriyel atlar yeniden metodoloji geliştirmek ve ilerletmek için çok çaba ayrılmış oldu. Fizyolojik bir ortamda, hem mekanik hem de kimyasal stimülasyon arter damarlarının 1,2 düzgün gelişimi ve işlevleri korumak için gereklidir.
Grubumuz tarafından geliştirilen Biyoreaktör kültür sistemleri, yerli damarları taklit bir tam kontrollü kemo-mekanik bir ortam içinde gemi yenilenmesini desteklemek üzere tasarlanmıştır. Bizim biyoreaktör montaj ve bakım işlemleri oldukça basit ve 3,4 yüksek tekrarlanabilir. Düz kas hücreleri (SMC'lere) uyumlu silikon tüp içinde 12 hafta veya pulsatil uyarı olmaksızın dişli ve biyoreaktör kültüre bir tübüler Poliglikolik asit (PGA) örgü üzerine numaralı seribaşı. Bazı öncekilerden biyoreaktör ayırt dört temel nitelik vardır. 1) sadece yerel kan damarlarının etrafındaki biyokimyasal simüle diğer kültür sistemlerinin aksine, bizim biyoreaktör kültür gemilere siklik radyal gerilme uygulayarak fizyolojik pulsatil bir ortam oluşturur. 2) Birden fazla mühendislik gemilerin kontrollü bir kimyasal ortam içinde farklı mekanik koşullar altında aynı anda yetiştirilebilir. 3) biyoreaktör hayvan implantasyon modeller için tasarlanmış gemilerin luminal yüzüne kolayca kaplanabilir endotel hücreleri bir tek katman (EC) sağlar. 4) Ayrıca biyoreaktör, belirli bir çap boyutuna uyacak şekilde tasarlanmış gemilerin değişik çap büyüklüğü ile kültür, her bireyin biyoreaktör uyarlamak için çaba harcamadan, 1 mm den 3 mm arasında değişiyordu.
Bizim biyoreaktör kültürü tasarlanmış gemilerin, belli bir dereceye kadar doğal kan damarlarının histolojik olarak benzerler. Damar duvarlarındaki hücreler, düz kas miyozin ağır zincir (SMMHC) 3 gibi olgun SMC kontraktil belirteçlerinin ifade eder. Önemli bir miktarda kolajen mühendislik damarları 5 nihai mekanik dayanım sorumlu ekstraselüler matriks içinde yatırılır. Biyokimyasal analizler de mühendislik damarların kollajen içeriği, ana arterler 6 ile karşılaştırılabilir olduğunu gösterir . Önemlisi, pulsatil biyoreaktör sürekli hayvan modellerinde 3,7 başarılı implantasyon deneyleri izin mekanik özellikleri sergileyen damarları yeniden. Ayrıca, bu biyoreaktör bir non-lineer optik mikroskobu (NLOM) 8 kullanarak kollajen remodeling zamanla gerçek zamanlı değerlendirilmesi ve takibi, non-invaziv, daha izin değiştirilebilir. Sonuç olarak, bu biyoreaktör fonksiyonel küçük çaplı vasküler greft rejenerasyon düzenleyen temel mekanizmaları incelemek için mükemmel bir platform olarak hizmet etmelidir.
Tasarlanmış gemilerin kalitesini büyük ölçüde doku kültüründe kullanılan SMC'lere kalitesini tarafından dikte. SMC fenotip kritik yönleri kontraktil morfolojisi, düşük geçit sayısı ve biyoreaktör içinde prolifere yeteneği içerir. Biz geçit sayısı polimer iskele üzerine hücre tohumlama zamanında P3 daha büyük olması önerilir. Ayrıca, SMC kaynakları kullanmadan önce mycoplasma özgür olduğunu onaylamak için çok önemlidir. Biz mycoplasma-kontamine hücreler biyoreaktör kültür…
The authors have nothing to disclose.
Bu çalışma (LEN hem de) Ulusal Sağlık Hibe R01 EB-008.836 Enstitüleri ve R01 HL083895 tarafından finanse edilmektedir. Biz araştırma biyoreaktörler yapmak için Daryl Smith Üniversitesi cam üfleme, teşekkür etmek ister.
Name of Reagent/Material | Supplier | Catalogue Number |
---|---|---|
FBS (Fetal Bovine Serum) Heat-Inactivated | HyClone | SH30071 |
DMEM | GIBCO | 11885 |
rhFGF-basic | R&B | 234-FSE |
rrPDGF-BB | R&B | 520-BB |
Penicilin G | Sigma | PENNA |
Copper(II) Sulfate | Sigma | C8027 |
Gylcine | Sigma | C8790 |
L-Alanine | Sigma | A7469-25G |
L-Proline | Sigma | P5607-25G |
Ascorbic Acid | Sigma | A4544-25G |
HEPES | Sigma | H3375-100G |
Silicone Stopper | Cole-Parmer | 06298-24 |
Masterflex tubes L/S | Cole-Parmer | 06508-16, 06508-18 |
Masterflex pump | Cole-Parmer | 7553-80 |
Dacron cuff | Maquet | 174406 |
PGA felt | Concordia | MO000877-01 |
4-0 1.5 metric Surgipro II suture | Syneture | VP-557-X |
6-0 0.7 metric Dexon suture | Syneture | 7538-11 |
0.22μm PTFE filters | Whatman | 6780-2502 |
Three Way Stop-cock | Edwards Lifesciences | 593WSC |
Pressure Transducer | Edwards Lifesciences | PX212 |
IV bags | Baxter | R4R2110 |
Saline dilution set | Arrow | W20030 |
Silicone tubing | Saint-Gobain | F05027 |