İki foton görüntüleme ve bir bağışıklık yanıtı 1 sırasında bazal koşullar altında lenf nodu içinde lenfosit motilite ve hücresel etkileşimleri ortaya çıkardı. Burada, T hücreleri, lenf düğümleri izolasyon ve görüntüleme motilite CD4 + T hücreleri eksplante lenf nodu evlatlık transferi göstermektedir.
İki foton görüntüleme bazal koşullar altında lenf nodu içinde ve bir immün yanıt 1 başlangıcında zarif bir koreografi motilite ve hücresel etkileşimleri ortaya çıkarmıştır. Burada, etiketli T hücreleri, lenf düğümleri izolasyonu, görüntüleme motilite ve CD4 + T hücreleri ilk kez 2002 2 açıklandığı gibi eksplante lenf nodu evlatlık transferi için yöntemler sunar. Bağışıklık hücrelerinin iki foton görüntüleme hücrelerinin bir hücre izci boya ile boyanarak floresan veya floresan proteini ifade ederek, ya etiketli olduğunu gerektirir. Biz bir alıcı hayvanın kuyruk ven, yaklaşık 15-30 dakika içinde lenfoid organlara evlerine içine donör farelerden elde edilen hücreler enjekte evlat edinen transfer prosedürü göstermektedir. Biz bir lenf nodu izolasyonu göstermek ve lenf düğümü eksize uygun montaj sağlamak için yöntemler tarif. Perfüze medya, sıcaklık ve lazer güç uygun oksijenasyon gibi diğer hususlar ele alınmıştır. Son olarak, naif CD4 3D video görüntüleri + T hücreleri mevcut 37 kararlı durum motilite sergileyen ° C
Bu video protokol evlatlık hücre transferi ve periferik lenf nodu görüntüleme lenfosit motilite için gerekli lenf nodu yalıtım ve hazırlık işlemleri göstermektedir. İki foton görüntüleme hem eksplante dokular (burada görüldüğü gibi) ve intravital hazırlıklarında konfokal görüntüleme üzerinde birçok avantajı vardır. Özellikle, infra-kırmızı uyarma ışık dağılımını en aza indiren ve lenf nodu kapsül altında görüntüleme ~ 300 mikrometre sağlar ve bazı dokularda 4 derin kullanın. Ayrıca, çoklu foton uyarma beyazlatma fotoğraf ve odak düzlemi yan dışarı doku hasarı en aza indirmek amacı odak noktasına sınırlıdır. Ancak, herhangi bir yeni bir teknik olduğu gibi, iki-foton görüntüleme, her derde deva değildir ve kendi sınırları ve potansiyel tuzaklar, akılda 5 tutulmalıdır. Bunlardan ilgi kollajen-hücreleri tarafından ikinci harmonik oluşumu gibi içsel sinyalleri dışında floresan ekstrensek probları veya floresan proteinlerle ifade etiketli olmalıdır gerekliliğidir. Izlenim bu etiketli hücreleri böylece siyah bir boşluk yüzme oluşturulur; gerçeği dalmış, ve yapı elemanları ve sayısız diğer etiketsiz, görünmez hücreleri karmaşık bir çevre ile etkileşim oysa.
Immünoloji iki foton görüntüleme sunulmasından bu yana altı yıl içinde, bu tekniğin, uzun süredir bozulmadan yaşayan dokuların süreç, hücre-hücre etkileşimleri, hücre hareketi ve lokalizasyonu, hücresel sinyal yollar ve sitotoksik hücre de dahil olmak üzere doğrudan görselleştirme soruları yanıtlamak için araştırmacılar izin verdi olaylar öldürüyor. Alanında ilk fenomenolojik açıklamaları ötesinde hızla evrim geçirdi ve bilgisayar modelleme ve simülasyon ile birlikte kantitatif analizleri, lenf düğümleri içinde görünüşte kaotik hücresel hareketler ve etkileşimleri etkin bir immün yanıt yol nasıl mantıklı başlıyor. Bu ilerleme immunoimaging iki foton mikroskopi uygulama açıklayan 100 kağıtları listeleyen yeni bir yayın 1, kapsamlı bir gözden geçirilir.
Rebecca Paquette reaktif hazırlanması ile yardım için teşekkür etmek istiyoruz. MPM Ruth L. Kirchstein predoctoral dostluk Sağlık ve hibe GM-41.514 (MDC), NS-48.252 (KGC), Ulusal Sağlık Enstitüleri de GM-48.071 (IP) desteği Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından desteklenmektedir.