全血刺激のためのアッセイを用いて炎症性サイトカインIL -1βの正確かつ簡単に測定
Summary
我々は、自己炎症表現型を呈する患者では、このようなIL – 1βの産生などの炎症性サイトカインの産生を測定するための単純なイムノアッセイについて説明します。病原体関連分子パターンと全血培養では細胞を活性化することによって、特にリポ多糖で、サイトカインの分泌は、便利な全血上清で評価することができます。
Abstract
免疫細胞による可溶性メディエーターの分泌に起因する炎症プロセスは、皮膚、関節や他の組織と同様に変更されたサイトカインの恒常性の様々な症状につながる。自然免疫系は病原体や他の内因性危険性の刺激を認識する上で重要な役割を果たしている。自然免疫細胞から放出される主要なサイトカインの一つは、インターロイキン（IL）-1です。したがって、我々は、炎症性サイトカインの分泌を測定するために、特に炎症性サイトカインIL -1β1、2、3の全血の刺激アッセイを利用しています。
自己炎症症候群を引き起こす先天性免疫系の遺伝学的機能障害を有する患者は、単独でLPSで刺激した時に成熟IL -1βの誇張されたリリースを示します。炎症に関連した病態を呈する患者の自然免疫成分を評価するために、我々はそのようなグラム陰性細菌のエンドトキシン、リポ多糖（LPSなどの病原体関連分子パターン（PAMPs）、に細胞性免疫応答を検出する特異的免疫測定法を使用してください）。これらのPAMPsは、自然免疫系4、5、6、7の細胞で検出される病原体認識受容体（PRRS）、によって認識されます。二次信号、ATP、ソームの活性化、その成熟、生理活性型4、5、6、8、9にプロIL -1β処理することが多タンパク質複合体のために必要であると組み合わせて主信号、LPS、、 10。
全血アッセイは、特定の細胞集団の労働集約的な分離と培養を必要とする他の方法と比較すると、サイトカイン産生を評価するための最小限のサンプルの操作が必要です。このメソッドは、他の全血を刺激アッセイとは異なり、むしろRPMI培地の比率でサンプルを希釈するよりも、我々は、白血球の希釈全血から直接カウントし、そのため、文化2の白血球の数がわかっているを刺激行います。この特定の全血アッセイの結果は、自己炎症病態を呈する患者コホートの解明に有用な新規技術を実証する。
Protocol
Discussion
説明した全血アッセイは、細胞の単離と豊富なサンプルの処理や操作を必要とする他の手法と比較してより密接に生理学的条件を模倣する簡単な方法です。このメソッドは、全血での白血球細胞をカウントするためにAOでCellometerビジョンを利用し、したがって、正確に細胞数に基づいてサンプルを標準化する方法を提供します。
それは他の抗凝固剤が知られているカル?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この研究は、関節炎および国立衛生研究所の筋骨格系と皮膚病研究所の学内研究プログラムによってサポートされていました。
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Sodium Heparin Blood Collection Tubes | BD | 366480 | ||
| RPMI 1640 Media | GIBCO | 21870-100 | ||
| Acridine Orange | Invitrogen | A3568 | ||
| Cellometer Vision | Nexcelom Bioscience | Contact company for instrument information | ||
| Cellometer Cell Counting Chambers | Nexcelom Bioscience | CHT4-SD100 | ||
| 24-well Tissue Culture Plate | Corning Costar | 3524 | ||
| Ultra Pure E. coli K12 LPS | InvivoGen | tlrl-eklps | ||
| Adenosine 5´-tripohasphate disodium salt hydrate | Sigma-Aldrich | A26209 | ||
| Bio-plex 200 system | Bio-Rad | Contact company for instrument information | ||
| Bio-Plex Pro human cytokine x-plex assay | Bio-Rad | x-plex assays are custom made according to specified cytokines of interest |
Riferimenti
- Martinon, F., Mayor, A., Tschopp, J. The inflammasomes: guardians of the body. Annu Rev Immunol. 27, 229-265 (2009).
- Thurm, C. W., Halsey, J. F. Measurement of cytokine production using whole blood. Curr Protoc Immunol. 66, 7-18 .
- Mariathasan, S. Cryopyrin activates the inflammasome in response to toxins and ATP. Nature. 440, 228-232 (2006).
- Gabay, C., Lamacchia, C., Palmer, G. IL-1 pathways in inflammation and human diseases. Nat Rev Rheumatol. 4, 232-241 (2010).
- Franchi, L., Elgenbrod, T., Muñoz-Planillo, R., Nuñez, G. The inflammasome: a caspase-1-activation platform that regulates immune responses and disease pathogenesis. Nat Immunol. 3, 241-247 (2009).
- Sims, J. E., Smith, D. E. The IL-1 family: regulators of immunity. Nat Rev Immunol. 2, 89-102 (2010).
- Haug, R., Joø, G. B., Westvik, A. B., Kierulf, P. Chemokine production and pattern recognition receptor (PRR) expression in whole blood stimulated with pathogen-associated molecular patterns (PAMPs. Cytokine. 32, 304-315 (2005).
- Netea, M. G. Differential requirement for the activation of the inflammasome for processing and release of IL-1bin monocytes and macrophages. Blood. 113, 2324-2335 (2009).
- Latz, E. The inflammasomes: mechanisms of activation and function. Curr Opin Immnol. 22, 28-33 (2010).
- Masters, S. L., Simon, A., Aksentijevich, I., Kastner, D. L. Horror autoinflammaticus: the molecular pathophysiology of autoinflammtory disease. Annu Rev Immunol. 27, 621-668 (2009).
