وهناك طريقة لتغليف المسام المبيض والثقافة في نظام 3 تحلل Proteolytically الأبعاد
Summary
وصفت طريقة جديدة لتغليف جريب مبيضي في شبكة الليفين – 3D ألجينات الإختراق. هذا النظام يجمع بين الدعم الهيكلي مع تدهور بروتين لدعم التنمية في بصيلات غير ناضجة لانتاج البويضات الناضجة. ويمكن تطبيق هذا الأسلوب لخلية المجاميع الثقافة للحفاظ على الخلية خلية الاتصالات دون الحد من التوسع.
Abstract
جراب المبيض هو الوحدة الفنية للالمبيض التي تفرز الهرمونات الجنسية وتدعم نضوج البويضة في المختبر تقنيات جريب توفير أداة لتطوير نموذج جريب من أجل التحقيق في البيولوجيا الأساسية ، وكذلك يجري تطويرها كأسلوب للحفاظ على الخصوبة في عيادة 1-4. ثقافتنا المختبر في النظام يعمل الهلاميات المائية من أجل محاكاة البيئة الأصلية المبيض عن طريق الحفاظ على العمارة الجريبي 3D ، خلية خلية التفاعلات ويشير هذا التطور نظير الصماوي جريب المباشر 5. سابقا ، كانت تربيتها بنجاح في بصيلات الجينات ، وهو خامل الطحالب المستمدة من السكاريد أن يخضع تهليم مع أيونات الكالسيوم 6-8. والهلاميات المائية ألجينات شكلت في تركيز 0.25 ٪ ث / ت الأكثر تساهلا للثقافة جريب ، والإبقاء على أعلى كفاءة التنموية 9. ألجينات الهلاميات المائية ليست قابلة للتحلل ، وبالتالي زيادة في النتائج قطرها جريب في قوة ضاغطة على المسام التي يمكن أن تؤثر نمو بصيلات 10. بعد ذلك قمنا بتطوير نظام ثقافة تستند على شبكة الليفين – ألجينات الإختراق (FA – IPN) ، والتي هي خليط من تبلور الليفين والجينات في وقت واحد. هذا المزيج يوفر بيئة حيوية لأن كلا من مكونات ميكانيكية تساهم في مصفوفة الصلابة في البداية ، ولكن البروتياز التي يفرزها جريب تزايد تدهور الليفين في المصفوفة ترك الجينات فقط لتقديم الدعم. مع IPN ، يمكن خفض محتوى ألجينات أدناه 0.25 ٪ ، وهو غير ممكن مع الجينات وحدها 5. وهكذا ، كما توسع المسام ، وسوف تواجه قوة ضاغطة بسبب انخفاض لمحتوى المواد الصلبة مخفضة. هنا ، نحن تصف طريقة التغليف والثقافة في المختبر نظام لجريبات المبيض داخل FA – IPN. البيئة الحيوية الميكانيكية يحاكي البيئة الطبيعية في المبيض الذي المسام الصغيرة الموجودة في القشرة الصلبة والانتقال إلى لب أكثر تساهلا لأنها تزيد في حجم 11. قد يكون العنصر الحاسم للتحلل ولا سيما بالنسبة للترجمة السريرية من أجل دعم أكبر من 10 6 أضعاف الزيادة في حجم المسام التي تخضع عادة الإنسان في الجسم الحي.
Protocol
Discussion
جراب المبيض قدم طريقة التغليف في FA – IPN يسمح الثقافة جريب في بيئة 3D في المختبر. FA – A IPN هي عملية ديناميكية وتستجيب للخلية في المصفوفة التي تحدد الخصائص الميكانيكية الأولية عن طريق الجمع بين كل من الليفين والجينات. خلال الثقافة ، وتنشيط بصيلات مغلفة البروتياز التي ت…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وقد تم تمويل هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة (وU54HD41857 PL1EB008542 والحيوية الأساسية P30 ضمن منحة اتحاد Oncofertility خارطة الطريق).
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Fetuin | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO | F3385 | ||
| FBS | Invitrogen, Gibco | 10082-139 | ||
| Aprotinin | Roche | 10236624001 | ||
| CaCl2 | Wako | 039-00475 | 40 mM | |
| EGF | Sigma | A412 | ||
| rFSH | A.F. Parlow, National Hormone and Peptide Program, National Institute of Diabetes and Digestive and Kidney Diseases | |||
| hCG | Sigma | CG-5 | ||
| Hyaluronidase | Sigma | A1603 | ||
| ITS | Sigma | I1884-1VL | ||
| L-15 | Gibco | 11415 | ||
| αMEM+Gluta MAX | Gibco | 32561 | ||
| Pen-Strep | Cellgro | 30-002-CI | ||
| TBS | Pierce | 28379 | ||
| Tisseel Fibrin kit | Baxter | 921030 | ||
| Sodium Alginate | FMC BioPolymers | LF200DL | Mw 418kDa |
Riferimenti
- Cortvrindt, R., Smitz, J., VanSteirteghem, A. C. In-vitro maturation, fertilization and embryo development of immature oocytes from early preantral follicles from prepuberal mice in a simplified culture system. Human Reproduction. 11, 2656-2666 (1996).
- Smitz, J., Cortvrindt, R., Hu, Y. X. Epidermal growth factor combined with recombinant human chorionic gonadotrophin improves meiotic progression in mouse follicle-enclosed oocyte culture. Human Reproduction. 13, 664-669 (1998).
- Xu, M., Banc, A., Woodruff, T. K., Shea, L. D. Secondary Follicle Growth and Oocyte Maturation by Culture in Alginate Hydrogel Following Cryopreservation of the Ovary or Individual Follicles. Biotechnology and Bioengineering. 103, 378-386 (2009).
- Smitz, J. Current achievements and future research directions in ovarian tissue culture, in vitro follicle development and transplantation: implications for fertility preservation. Human Reproduction Update. 16, 395-414 (2010).
- Shikanov, A., Xu, M., Woodruff, T. K., Shea, L. D. Interpenetrating fibrin-alginate matrices for in vitro ovarian follicle development. Biomaterials. 30, 5476-5485 (2009).
- West, E. R., Xu, M., Woodruff, T. K., Shea, L. D. Physical properties of alginate hydrogels and their effects on in vitro follicle development. Biomaterials. 28, 4439-4448 (2007).
- Kreeger, P. K., Fernandes, N. N., Woodruff, T. K., Shea, L. D. Regulation of mouse follicle development by follicle-stimulating hormone in a three-dimensional in vitro culture system is dependent on follicle stage and dose. Biology of Reproduction. 73, 942-950 (2005).
- Pangas, S. A., Saudye, H., Shea, L. D., Woodruff, T. K. Novel approach for the three-dimensional culture of granulosa cell-oocyte complexes. Tissue Engineering. 9, 1013-1021 (2003).
- Xu, M., West, E., Shea, L. D., Woodruff, T. K. Identification of a stage-specific permissive in vitro culture environment for follicle growth and oocyte development. Biology of Reproduction. 75, 916-923 (2006).
- Xu, M. Encapsulated Three-Dimensional Culture Supports Development of Nonhuman Primate Secondary Follicles. Biology of Reproduction. 81, 587-594 (2009).
- West, E. R., Shea, L. D., Woodruff, T. K. Engineering the follicle micro environment. Seminars in Reproductive Medicine. 25, 287-299 (2007).
- Xu, M., Kreeger, P. K., Shea, L. D., Woodruff, T. K. Tissue-engineered follicles produce live, fertile offspring. Tissue Engineering. 12, 2739-2746 (2006).
- Ebisch, I. M. W. Review of the role of the plasminogen activator system and vascular endothelial growth factor in subfertility. Fertility and Sterility. 90, 2340-2350 (2008).
