描述一个卵巢卵泡封装在三维纤维蛋白 – 海藻酸钠的互穿网络的新方法。此系统结合蛋白水解降解结构的支持,以支持发展不成熟的卵泡产生成熟的卵母细胞。这种方法可应用于文化细胞聚集,保持不限制扩张的细胞 – 细胞接触。
卵泡是卵巢分泌性激素的功能单元,并支持卵母细胞成熟 。体外卵泡技术提供了一个工具,以调查的基本生物学模型卵泡发育,并进一步被作为一种技术,保留生育开发诊所1-4。我们在体外培养系统,采用水凝胶以模仿卵巢原生环境,保持3D滤泡结构,细胞间的相互作用和旁分泌的信号,直接卵泡发育5。在此之前,卵泡培养成功的海藻酸钠,一种惰性藻类衍生的多糖,经过与钙离子凝胶6-8。在浓度为0.25%W / V形成的海藻酸钠水凝胶是最宽松的卵泡文化,并保留了最高的发展能力9。海藻酸钠水凝胶不降解,从而增加卵泡直径结果在压缩力的毛囊,会影响卵泡发育10。我们后来发展为基础的文化系统,纤维蛋白 – 海藻酸钠互穿网络(FA – IPN),其中纤维蛋白和褐藻胶的混合物凝胶同时。这种组合提供了一个动态的力学环境,因为这两个组件有助于矩阵刚性最初,然而,日益增长的卵泡分泌的蛋白酶降解,只留下海藻酸钠提供支持的矩阵中的纤维蛋白。使用IPN,海藻酸钠含量可减少0.25%以下,这是不符合海藻酸钠仅5。因此,随着卵泡的扩大,它会遇到由于减少固体含量减少压缩力。在这里,我们描述了一种封装方法,并在在FA – IPN的卵巢卵泡体外培养体系。动态力学环境模仿自然卵巢的环境中,小卵泡驻留在一个刚性的皮质,并移动到一个更宽松的髓质,因为它们增加在大小11。为了支持大于10的6倍量的增加,人类毛囊通常在体内进行降解成分,可能是特别为临床翻译的关键。
所提出的卵泡在FA – IPN的封装方法允许在体外的3D环境中的卵泡文化。一个FA – IPN是一个动态的,细胞的反应矩阵最初的机械性能相结合的纤维蛋白和海藻酸钠决定。在文化,封装毛囊激活蛋白酶降解的IPN只有一个组成部分,纤维蛋白,它在一个逐渐下降的凝胶的刚性,完全是由文化的剩余海藻酸钠贡献的结果。与FA – IPN获得的动态力学性能与自然环境的发展毛囊相一致,并已提出改善率比?…
The authors have nothing to disclose.
这项工作是由美国国立卫生研究院(U54HD41857和PL1EB008542,P30内Oncofertility联盟路线图资助的生物材料的核心)。