डिम्बग्रंथि कूप और एक Proteolytically सड़ सकने 3 आयामी प्रणाली में इनकैप्सुलेशन संस्कृति के लिए एक विधि
Summary
एक 3D आतंच alginate interpenetrating नेटवर्क में डिम्बग्रंथि कूप encapsulation के लिए एक नई विधि में वर्णित है. इस प्रणाली के proteolytic गिरावट के साथ संरचनात्मक समर्थन को जोड़ती अपरिपक्व रोम के विकास का समर्थन करने के लिए परिपक्व oocytes उत्पादन. इस विधि संस्कृति सेल समुच्चय के लिए लागू किया जा सकता है विस्तार को सीमित किए बिना सेल सेल संपर्क बनाए रखना.
Abstract
डिम्बग्रंथि कूप अंडाशय है कि सेक्स हार्मोन secretes की कार्यात्मक इकाई है और oocyte परिपक्वता का समर्थन करता है इन विट्रो कूप तकनीक में मॉडल कूप विकास के लिए एक उपकरण प्रदान करने के क्रम में बुनियादी जीव विज्ञान की जांच, और आगे तकनीक में प्रजनन क्षमता बनाए रखने के रूप में विकसित किया जा रहा 1-4 क्लिनिक. हमारे में इन विट्रो संस्कृति प्रणाली hydrogels रोजगार के क्रम में 3 डी कूपिक वास्तुकला, सेल सेल बातचीत और paracrine संकेत है कि प्रत्यक्ष कूप 5 विकास को बनाए रखने के द्वारा देशी डिम्बग्रंथि पर्यावरण नकल. इससे पहले, रोम सफलतापूर्वक alginate, एक आभ्यांतरिक शैवाल व्युत्पन्न polysaccharide के कैल्शियम 6-8 आयनों के साथ जमाना प्रक्रिया में सभ्य थे. Alginate 0.25% w / ध् की एकाग्रता में गठन hydrogels कूप संस्कृति के लिए सबसे अनुमोदक थे, और उच्चतम 9 विकास क्षमता को बनाए रखा. Alginate hydrogels degradable, नहीं इस प्रकार कूप है कि कूप 10 विकास को प्रभावित कर सकता पर एक compressive शक्ति में कूप व्यास परिणाम में वृद्धि कर रहे हैं. हम बाद में एक संस्कृति एक आतंच alginate interpenetrating (एफए IPN) नेटवर्क है, जो में आतंच और alginate की एक मिश्रण एक साथ gelled हैं पर आधारित प्रणाली विकसित की है. इस संयोजन एक गतिशील यांत्रिक वातावरण प्रदान करता है क्योंकि दोनों घटकों मैट्रिक्स कठोरता शुरू में योगदान है, लेकिन, बढ़ती कूप द्वारा secreted proteases ही समर्थन प्रदान alginate छोड़ने मैट्रिक्स में आतंच नीचा. IPN के साथ, alginate सामग्री नीचे 0.25% है, जो अकेले 5 alginate के साथ संभव नहीं है कम किया जा सकता है. इस प्रकार, के रूप में कूप फैलता, यह एक कम compressive कम ठोस सामग्री के लिए कारण बल का अनुभव होगा. इस के साथ साथ, हम encapsulation विधि और एक एफए IPN भीतर डिम्बग्रंथि रोम के लिए एक में इन विट्रो संस्कृति प्रणाली का वर्णन. गतिशील यांत्रिक वातावरण प्राकृतिक डिम्बग्रंथि वातावरण जिसमें छोटे रोम एक कठोर प्रांतस्था में रहते हैं और अधिक अनुमोदक मज्जा करने के लिए कदम के रूप में वे 11 आकार में वृद्धि mimics . degradable नैदानिक अनुवाद के लिए विशेष रूप से महत्वपूर्ण घटक क्रम में 10 से अधिक मात्रा में 6 गुना वृद्धि हुई है कि मानव रोम vivo में सामान्य से गुजरना समर्थन हो सकता है.
Protocol
Discussion
प्रस्तुत एक एफए IPN में डिम्बग्रंथि कूप encapsulation विधि इन विट्रो में एक 3 डी वातावरण में कूप संस्कृति की अनुमति देता है. एक एफए – IPN एक गतिशील, सेल उत्तरदायी मैट्रिक्स जिसमें प्रारंभिक यांत्रिक गुणों आतंच और…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
यह काम एनआईएच (U54HD41857 और PL1EB008542, p30 Oncofertility कंसोर्टियम रोडमैप अनुदान के भीतर बायोमैटिरियल्स कोर) द्वारा वित्त पोषित किया गया था.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Fetuin | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO | F3385 | ||
| FBS | Invitrogen, Gibco | 10082-139 | ||
| Aprotinin | Roche | 10236624001 | ||
| CaCl2 | Wako | 039-00475 | 40 mM | |
| EGF | Sigma | A412 | ||
| rFSH | A.F. Parlow, National Hormone and Peptide Program, National Institute of Diabetes and Digestive and Kidney Diseases | |||
| hCG | Sigma | CG-5 | ||
| Hyaluronidase | Sigma | A1603 | ||
| ITS | Sigma | I1884-1VL | ||
| L-15 | Gibco | 11415 | ||
| αMEM+Gluta MAX | Gibco | 32561 | ||
| Pen-Strep | Cellgro | 30-002-CI | ||
| TBS | Pierce | 28379 | ||
| Tisseel Fibrin kit | Baxter | 921030 | ||
| Sodium Alginate | FMC BioPolymers | LF200DL | Mw 418kDa |
Riferimenti
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