タンパク質分解的に分解性3次元システムにおける卵胞のカプセル化と文化のための方法
Summary
3Dフィブリン-アルギン酸相互貫入ネットワークにおける卵胞のカプセル化のための新しい方法が記載されている。このシステムは、成熟した卵母細胞を生成するために未熟な卵胞の発達をサポートするためにタンパク質分解と構造的な支持を兼ね備えています。このメソッドは、拡張を制限することなく、細胞間接触を維持するために培養細胞の集合体に適用してもよい。
Abstract
卵胞は、性ホルモンを分泌する卵巣の機能単位であり、卵母細胞の成熟を サポートしています。 試験管内卵胞の技術では基本的な生物学を調査するためにモデルの卵胞発育にツールを提供し、さらにで妊孕性を温存する技術として開発されているクリニック1-4。私たちの体外培養系では細胞間相互作用および傍分泌シグナリングその直接の卵胞発育5、3D濾胞アーキテクチャを維持することによって、ネイティブの卵巣の環境を模倣するために、ヒドロゲルを採用しています。以前に、卵胞が正常にアルギン酸塩、カルシウムイオン6月8日でゲル化を起こして不活性藻類由来の多糖類で培養した。 W / V 0.25％の濃度で形成されたアルギン酸ハイドロゲルは、卵胞の培養のための最も寛大であり、最も高い発生能9を保持。アルギン酸ハイドロゲルは、このように、卵胞の成長10を影響を与える可能性が卵胞に圧縮力で卵胞の直径の結果の増加分解性ではありません。私たちは、その後、フィブリンとアルギン酸の混合物を同時にゲル化されたフィブリンアルギン酸相互貫入ネットワーク（FA – IPN）、に基づいて、培養系を開発した。両方のコンポーネントが最初にマトリックスの剛性に寄与するので、この組み合わせは、動的な機械的な環境を提供しますが、成長する卵胞から分泌されるプロテアーゼは、サポートを提供する唯一のアルギン酸を残して行列にフィブリンを低下させる。 IPNと、アルギン酸の含有量は、アルギン酸5のみでは不可能である、0.25％未満に減少することができます。このように、卵胞が拡大するにつれて、それが減少固形分含有量のために少なく圧縮力が発生します。ここで、我々は、カプセル化方式とFA – IPN内の卵胞のためのin vitro培養系を説明します。動的な機械的な環境は、小さな卵胞が硬い皮質に存在し、彼らはサイズが11に増加するとより寛大髄質に移動する自然卵巣の環境を模倣しています。分解可能な成分は、人間の毛包は、通常は生体内で受けることが体積で10以上の6倍の増加をサポートするために、臨床翻訳のために特に重要になることがあります。
Protocol
Discussion
FA – IPNの提示卵胞のカプセル化手法は 、in vitro での 3D環境での卵胞培養することができます。 FA – IPNは、初期の機械的性質がフィブリンとアルギン酸塩の両方の組み合わせによって決定される動的な、細胞応答行列です。培養中に、カプセル化された卵胞はもっぱら文化の終わりに残っているアルギン酸塩により提供され徐々に減少するゲルの剛性につながるIPNの一成分のみ、…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は、NIH（U54HD41857とPL1EB008542、Oncofertilityコンソーシアムのロードマップ助成内P30バイオマテリアルコア）によって賄われていた。
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Fetuin | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO | F3385 | ||
| FBS | Invitrogen, Gibco | 10082-139 | ||
| Aprotinin | Roche | 10236624001 | ||
| CaCl2 | Wako | 039-00475 | 40 mM | |
| EGF | Sigma | A412 | ||
| rFSH | A.F. Parlow, National Hormone and Peptide Program, National Institute of Diabetes and Digestive and Kidney Diseases | |||
| hCG | Sigma | CG-5 | ||
| Hyaluronidase | Sigma | A1603 | ||
| ITS | Sigma | I1884-1VL | ||
| L-15 | Gibco | 11415 | ||
| αMEM+Gluta MAX | Gibco | 32561 | ||
| Pen-Strep | Cellgro | 30-002-CI | ||
| TBS | Pierce | 28379 | ||
| Tisseel Fibrin kit | Baxter | 921030 | ||
| Sodium Alginate | FMC BioPolymers | LF200DL | Mw 418kDa |
Riferimenti
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