Proteolytically 분해 3 차원 시스템에서 난소 대과의 캡슐화 및 문화에 대한 방법
Summary
3D 섬유소 – 알지네이트요 interpenetrating 네트워크에 난소 대과의 캡슐에 대한 새로운 방법을 설명합니다. 이 시스템은 성숙 oocytes을 만들어 미숙 모공의 개발을 지원하기 위해 proteolytic 저하로 구조적 지원을 결합한 제품입니다. 이 방법은 확장을 제한하지 않고 세포 세포 접촉을 유지하기 위해 문화 셀 집계에 적용될 수 있습니다.
Abstract
난소 대과는 섹스 호르몬을 secretes 난소의 기능 단위이며, oocyte의 성숙을 지원합니다. 체외의 대과 기술의 기본적인 생물을 조사하기 위해 모델 대과 개발하는 도구를 제공하고, 추가로 다산을 보존하는 기술로 발전되고있다 클리닉 1-4. 우리의 체외 배양 시스템은, 세포 세포의 상호 작용 및 paracrine 신호 것을 직접 고치 개발 5 3D follicular 구조를 유지하여 기본 난소 환경을 모방하기 위해 hydrogels을 사용합니다. 이전 모공이 성공적으로 알지네이트요, 칼슘 이온 6-8로 겔화를 겪습 불활성 조류 파생 다당류에 교양되었습니다. 0.25 % W / V의 농도에서 형성된 알긴산의 hydrogels는 뿌리 문화에 가장 허용되었고, 최고의 개발 역량 9 유지. 알긴산의 hydrogels 따라서, 뿌리의 성장 10 영향을 줄 수 있습니다 뿌리 압축력에 뿌리 직경 결과에 증가 분해되지 않습니다. 우리는 이후 섬유소와 알지네이트요의 혼합물을 동시에 gelled있는 섬유소 – 알지네이트요 interpenetrating 네트워크 (FA – IPN)을 기반으로하는 문화 시스템을 개발했습니다. 두 구성 요소가 처음 매트릭스 강성에 기여하기 때문에이 조합은 역동적인 기계 환경을 제공하지만, 성장 뿌리에 의해 분비 프로 테아제 지원을 제공하기 위해서만 알지네이트요를 떠나 매트릭스의 섬유소를 저하. IPN으로 알지네이트요 내용은 혼자 5 알지네이트요 가능하지 않습니다 0.25 %, 아래 줄일 수있다. 따라서 뿌리가 확장되면, 그것은 감소 고체 내용으로 인해 감소 압축 힘을 경험하게 될 것입니다. 여기에, 우리는 캡슐화 방법 및 FA – IPN 이내에 난소의 모공에 대한의 체외 배양 시스템을 설명합니다. 동적 기계적 환경은 작은 모공이 단단한 피질에 거주하고 크기가 11 증가로 더 허용 모수로 이동하는 자연 난소 환경을 모방한 것이었 지요. 분해 구성 요소는 인간의 머리카락은 정상적으로 생체내에서 받아야 해당 볼륨에있는보다 큰 10 6 배 증가를 지원하기 위해 임상 번역에 특히 중요있을 수 있습니다.
Protocol
Discussion
FA – IPN의 표시 난소 대과의 캡슐 방법은 체외에서 3D 환경에서 뿌리 문화를 수 있습니다. FA – IPN은 초기 기계적 특성이 섬유소와 알지네이트요 모두의 조합에 의해 결정하는 동적 셀 응답 매트릭스입니다. 문화 동안 캡슐 대과은 전적으로 문화의 끝에 남은 알지네이트요에 의해 공헌하는 점차 감소 젤 강성 결과 IPN의 한 구성 요소, 섬유소를 저하 프로 테아제을 활성화한다. FA – IPN로 얻은 동…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 NIH (U54HD41857 및 PL1EB008542, Oncofertility 컨소시엄 로드맵 부여 이내 P30 Biomaterials 코어)에 의해 재정 지원되었다.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Fetuin | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO | F3385 | ||
| FBS | Invitrogen, Gibco | 10082-139 | ||
| Aprotinin | Roche | 10236624001 | ||
| CaCl2 | Wako | 039-00475 | 40 mM | |
| EGF | Sigma | A412 | ||
| rFSH | A.F. Parlow, National Hormone and Peptide Program, National Institute of Diabetes and Digestive and Kidney Diseases | |||
| hCG | Sigma | CG-5 | ||
| Hyaluronidase | Sigma | A1603 | ||
| ITS | Sigma | I1884-1VL | ||
| L-15 | Gibco | 11415 | ||
| αMEM+Gluta MAX | Gibco | 32561 | ||
| Pen-Strep | Cellgro | 30-002-CI | ||
| TBS | Pierce | 28379 | ||
| Tisseel Fibrin kit | Baxter | 921030 | ||
| Sodium Alginate | FMC BioPolymers | LF200DL | Mw 418kDa |
Riferimenti
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