Um dispositivo micro com padrões Groove para estudar o comportamento celular
Summary
Nós descrevemos um protocolo para a fabricação de dispositivos microfluídicos que pode permitir a captura de células e cultura. Nesta abordagem padronizada microestruturas, tais como sulcos dentro de canais microfluídicos são usados para criar regiões de cisalhamento de baixa tensão dentro do qual célula pode encaixar.
Abstract
Nós descrevemos um dispositivo micro com padrões microgrooved para estudar o comportamento celular. Esta plataforma microfluídica consiste de um canal top fluídico e um substrato de fundo microgrooved. Para fabricar os canais microgrooved, um top poli (dimetilsiloxano) molde (PDMS), contendo a impressão dos canais microfluídicos foram alinhados e ligados a um substrato microgrooved. Usando este dispositivo, as células de fibroblastos de rato foram imobilizados e padronizada dentro de substratos microgrooved (25, 50, 75 e 100 mm de largura). Estudar a apoptose em um dispositivo micro, mídia contendo peróxido de hidrogênio, anexina V e iodeto de propídio foi perfundido para o canal fluídico por 2 horas. Descobrimos que as células expostas ao estresse oxidativo se tornou apoptóticos. Estas células em apoptose foram confirmadas pela anexina V que obrigado a fosfatidilserina no folheto externo da membrana plasmática durante o processo de apoptose. Usando este dispositivo micro com padrões microgrooved, o processo de apoptose foi observado em tempo real e analisadas utilizando um microscópio invertido contendo uma câmara de incubação (37 ° C CO, 5% 2). Portanto, este dispositivo micro incorporado com substratos microgrooved poderia ser útil para estudar o comportamento celular e desempenho high-throughput screening de drogas.
Protocol
Discussion
Células foram imobilizadas e padronizada dentro de substratos microgrooved em um dispositivo micro. O processo de apoptose de células expostas a peróxido de hidrogênio foi observada em tempo real e analisados utilizando anexina V e iodeto de propídio. Assim, este dispositivo micro contendo canais de Micro-poderia ser útil para high-throughput screening de drogas.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| PDMS | Reagent | K.R. Anderson Co. Inc. | 2065622 | Poly(dimethylsiloxane), Dow Corning Sylgard 184 (8.6 lb) |
| DMEM | medium | Invitrogen | 11965 | Dulbecco’s Modified Eagle’s Media |
| FBS | serum | Invitrogen | 10082-147 | Fetal Bovine Serum |
| Hydrogen peroxide | Reagent | Sigma Aldrich | H1009 | |
| Apoptosis assay | Invitrogen | V13242 | Annexin A, propidium iodide | |
| Negative photoresist | Microchem | SU-8 2015 | ||
| Si wafer | Tool | 4 inch silicone wafer | ||
| Reactive oxygen plasma | Reagent | Harrick Scientific | treat wafer 5 min at 30W | |
| inverted microscope | Tool | Nikon | TE 2000 |
Riferimenti
- Chung, B. G., Park, J. W., Hu, J. S., Huang, C., Monuki, E. S., Jeon, N. L. A hybrid microfluidic-vacuum device for interfacing with conventional cell culture platform. BMC Biotechnol. 7, (2007).
- Khademhosseini, A., Yeh, J., Eng, G., Karp, J., Kaji, H., Borenstein, J., Farokhzad, O. C., Langer, R. Cell docking inside microwells within reversibly sealed microfluidic channels for fabricating multiphenotype cell arrays. Lab Chip. 5, 1380-1386 (2005).
- Whittemore, E. R., Loo, D. T., Watt, J. A., Cotman, C. W. A detailed analysis of hydrogen peroxide-induced cell death in primary neuronal culture. Neuroscienze. 67, 921-932 (1995).
