Un gradiente di generazione del dispositivo Microfluidic di Biologia Cellulare
Summary
Abbiamo descritto un protocollo per la microfabbricazione del gradiente apparecchio che può generare microfluidi che possono generare gradienti spaziali e temporali ben definite microambiente. In questo approccio, il gradiente di generazione dispositivo a microfluidi può essere utilizzato per studiare la migrazione delle cellule diretto, l'embriogenesi, la guarigione delle ferite, e le metastasi del cancro.
Abstract
La fabbricazione e il funzionamento di un gradiente che generano dispositivo a microfluidi per studiare il comportamento cellulare è descritto. Una piattaforma microfluidica è uno strumento che permette di sperimentazione, perché può manipolare con precisione i flussi di liquidi, consentono high-throughput esperimenti, e generare stabile gradienti di concentrazione solubile. Rispetto ai convenzionali generatori di pendenza, poli (dimetilsiloxano) (PDMS) microfluidica dispositivi basati in grado di generare gradienti di concentrazione stabile di fattori di crescita ben definiti profili. Qui, abbiamo sviluppato semplice gradiente dispositivi che generano microfluidica con tre ingressi separati. Tre microcanali combinati in un unico microcanali per generare gradienti di concentrazione. La stabilità e la forma dei gradienti di fattori di crescita sono stati confermati da isothyiocyanate fluoresceina (FITC)-destrano con un peso molecolare simile al fattore di crescita epidermico (EGF). L'utilizzo di questo dispositivo a microfluidi, abbiamo dimostrato che i fibroblasti esposti a gradienti di concentrazione di EGF migrati verso concentrazioni più elevate. L'orientamento direzionale di migrazione delle cellule e della motilità delle cellule migrano sono state quantitativamente valutate attraverso l'analisi delle cellule di tracking. Così, questo gradiente apparecchio che può generare microfluidi potrebbe essere utile per studiare e analizzare il comportamento delle cellule migrano.
Protocol
Discussion
Cellule esposte a gradienti di concentrazione stabile di EGF in un dispositivo a microfluidi migrato verso concentrazioni più elevate. L'orientamento direzionale della migrazione cellulare, indice chemiotattica, la motilità delle cellule migrano sono state indagate attraverso l'analisi delle cellule di tracking. Pertanto, questo gradiente di generazione piattaforma microfluidica potrebbe essere utile per studiare le metastasi del cancro, l'embriogenesi, e la guida degli assoni.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Dextran-FITC | Reagent | Sigma Aldrich | FD10S | Fluorescein isothiocyanate (FITC) conjugated-dextran (10kD) |
| hr-EGF | Invitrogen | 13247-051 | human recombinant Epidermal growth factor | |
| PDMS | K.R. Anderson Co. Inc. | 2065622 | Poly(dimethylsiloxane) (PDMS), Dow Corning Sylgard 184 (8.6 lb) | |
| Negative photoresist | Microchem | SU-8 50 | ||
| Si wafer | silicone wafer, 4 inch | |||
| Petri dishes | ||||
| Polyethylene tubing | Becton Dickinon | PE 20 | ||
| PBS | Invitrogen | |||
| Fibronectin | ||||
| NIH 3T3 | cell-line | fibroblast cells | ||
| Inverted microscope | Nikon | TE 2000 |
Riferimenti
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