Summary

인슐린 주입 및 성인에서 인슐린 민감도를 측정하는 Hemolymph 추출 Drosophila melanogaster</em

Published: June 30, 2011
doi:

Summary

보존 인슐린 신호 전달은 과일 파리에서 찾은 경로<em> Drosophila melanogaster</em>이 유기체 유형 II 당뇨병을 포함하여 신진 대사 장애를 모델링에 대한 잠재적인 도구를합니다. 이를 위해서는 효과적으로 성인 비행에서 주변 포도당 처리에 체계적 인슐린 작용을 측정하는 생리 assays를 확립하는 것이 중요합니다.

Abstract

보존 영양 감지 메커니즘은 펩티드가 발달 애벌레 단계 1,2 중에 포도당 항상성을 유지하기 위해 각각 포유류의 인슐린과 글루카곤, 기능과 유사한 포유류와 과일 날아 사이에 존재합니다. 대부분 사후 mitotic 성인 파리에서 연구가 세포 (IPCs) 3를 생산 인슐린과 같은 펩티드 (ILP)의 유전자 절제의 결과로 포도당 항상성의 섭동을 공개했습니다. 따라서 성인 과일 파리 2 형 당뇨병을 포함하여 신진 대사 장애에 적합한 유전자 모델 시스템으로 큰 약속을 잡아. 추가로 과일 파리 시스템을 개발하려면, 포유류에서 포도당 내성과 인슐린 민감도를 측정하는 데 사용되는 비교 생리학 assays 설립해야합니다. 이를 위해, 우리는 최근 성인 비행에 경구 포도당 내성 응답을 측정하는 소설 절차를 설명하고 포도당 항상성은 4,5 유지 성인 IPCs의 중요성을 보여주었다. 여기, 우리는 인슐린 주사 6 이전에 설명한 절차를 수정하고 성인 비행의 말초 인슐린 민감도를 측정하는 소설 hemolymph 추출 방식으로 결합합니다. 유니 클리 우리 프로토콜은 인슐린 주사, 인슐린 신호 돌연변이 성인 비행에서 포도당 내성과 인슐린 민감도에 영향을 미치는 잠재적인 개입을 특징으로이 가능하게 방법론에 주변 포도당 부하를 처리하는 성인 비행 능력의 직접적인 생리적 측정이 가능합니다.

Protocol

1. 인슐린 솔루션 준비 0.01 MG / ML의 농도를 달성하기 위해 PBS에 인슐린을 용해하여 새로운 소 인슐린 솔루션을 준비합니다. 인슐린 / PBS 및 제어 PBS 솔루션 모두 사출 절차를 통해 얼음에 보관해야합니다. 이러한 솔루션은 0.5 % (V / V) FD & C 블루 번호와 함께 준비한다. 1 식용 색소. 2. 니들 준비 및 설정 사출 ; 당겨, 210, 속도, 100, 시간, 200 (100ms) 열, 345 : 풀…

Discussion

이 보고서에 설명된 기술은 Drosophila의 hemolymph 구성에 감지 변경의 결과로 생리 과정을 조사하는 연구에서 잠재적으로 유용합니다. 이러한 방식으로 주입하고 hemolymph 컬렉션을 결합함으로써, 특정 실험 치료 또는 조작의 즉각적인 생리학 관련 효과를 확인할 수 있습니다. 잘린 2와 관련된 이전의 기술을 통해 hemolymph 수집이 "방혈"기술의 주요 장점은 직감 contents.If 치료가 때…

Divulgazioni

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

이 작품은 NIA에서 YW.CF (AG21068, AG31086)에 보조금 지원했다.

Materials

Name of the reagent/equipment Company Catalogue number
Bovine insulin Sigma I5500
Infinity Glucose Reagent Thermo Electron Corporation TR1541
Manual microinjector Sutter Instrument  
P-87 Flamming/Brown micropipette puller Sutter Instrument  
Single barrel borosilicate capillary glass A-M Systems 626000
FD&C Blue No. 1 McCormick & Company  
1 μl microcapillary tubes Drummond  
Three-axis manual micromanipulator and base World Precision Instruments  

Riferimenti

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Citazione di questo articolo
Haselton, A. T., Fridell, Y. C. Insulin Injection and Hemolymph Extraction to Measure Insulin Sensitivity in Adult Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (52), e2722, doi:10.3791/2722 (2011).

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