L&#39;insulina per iniezione ed estrazione emolinfa per misurare la sensibilità all&#39;insulina nei adulti Drosophila melanogaster</em

Summary

Segnalazione dell'insulina conservato percorsi trova nel moscerino della frutta Drosophila melanogaster Fanno di questo organismo un potenziale strumento per la modellazione di malattie metaboliche tra cui diabete di tipo II. A tal fine, è fondamentale per stabilire i test fisiologici per misurare in modo efficace azione sistemica all'insulina nello smaltimento del glucosio periferico nella mosca adulta.

Abstract

Conservati i meccanismi di rilevazione dei nutrienti esistono tra di mammiferi e moscerino della frutta dove peptidi simili all'insulina nei mammiferi e il glucagone, rispettivamente la funzione di mantenere l'omeostasi del glucosio durante lo sviluppo larvale ^1,2 fasi. Studi sulla gran parte post-mitotico mosche adulte hanno rivelato perturbazione dell'omeostasi del glucosio come il risultato di ablazione genetica di insulin-like peptide (ILP), cellule che producono (IPC) ^3. Così, moscerini della frutta adulti sono molto promettenti come un sistema idoneo modello genetico di malattie metaboliche tra cui diabete di tipo II. Per sviluppare ulteriormente il sistema di moscerino della frutta, paragonabile test fisiologici utilizzati per misurare la tolleranza al glucosio e la sensibilità all'insulina nei mammiferi devono essere stabiliti. A tal fine, abbiamo recentemente descritto una nuova procedura per la misurazione della risposta orale di tolleranza al glucosio nei mosca adulta e ha dimostrato l'importanza di IPC adulti nel mantenimento dell'omeostasi del glucosio ^4,5. Qui, abbiamo modificato la procedura descritta in precedenza per l'iniezione di insulina ⁶ e combinato con un nuovo metodo di estrazione emolinfa per misurare la sensibilità periferica all'insulina nei mosca adulta. Unicamente, il nostro protocollo permette misurazioni dirette fisiologica della capacità della mosca adulta di disporre di un carico di glucosio periferico a seguito di iniezione di insulina, una metodologia che rende possibile caratterizzare mutanti segnalazione dell'insulina e gli interventi possibili riguardano tolleranza al glucosio e la sensibilità all'insulina nei mosca adulta.

Protocol

1. L'insulina Soluzione Preparazione

1. Preparare una soluzione fresca bovina insulina sciogliendo insulina in PBS per raggiungere la concentrazione di 0,01 mg / ml. Sia insulina / PBS e controllo PBS soluzioni devono essere tenuti in ghiaccio per tutta la procedura di iniezione. Queste soluzioni devono essere preparate con il 0,5% (v / v) FD & C non blu. 1 colorante alimentare.

2. Ago Preparazione e iniezione Set-up

1. Preparare gli aghi capillare di vetro con un puller.The micropipetta seguenti impostazioni di estrattore produrre aghi di qualità sufficiente per l'iniezione: Calore, 345; Pull, 210; Velocità, 100; Te....

Discussion

La tecnica descritta in questo rapporto è potenzialmente utile in qualsiasi studio che indaga i processi fisiologici con conseguente alterazioni rilevabili nella composizione emolinfa Drosophila. Grazie alla combinazione di iniezione e la raccolta emolinfa in questo modo, è possibile accertare gli effetti immediati fisiologicamente rilevanti di un particolare trattamento sperimentale o manipolazione. Il vantaggio principale di questa tecnica "salasso" nella raccolta di emolinfa rispetto alle tecniche .......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Nome del reagente / attrezzature	Azienda	Numero di catalogo
Insulina bovina	Sigma	I5500
Infinity glucosio reagente	Thermo Electron Corporation	TR1541
Manuale microinjector	Sutter strumento
P-87 Flamming / Brown micropipetta estrattore	Sutter strumento
Singolo cilindro in vetro borosilicato capillare	Sistemi AM	626000
FD & C blu n ° 1	McCormick & Company
1 tubi microlitri microcapillare	Drummond
Tre assi micromanipolatore manuale e la base	Mondo Strumenti di precisione