Trichuris Muris Infezione: un modello di tipo 2 Immunità e infiammazione nell'intestino

Sommario

Trichuris infezione Muris è un modello di immunità intestinale Th2 dove topi resistenti generare una risposta protettiva Th2 e topi suscettibili generare una patologica risposta Th1.

Abstract

Trichuris Muris è un patogeno naturale di topi ed è biologicamente e antigenicamente simili alle specie di Trichuris che infettano gli esseri umani e animali ^1. Uova infette sono dati mediante sonda gastrica, schiudono nel piccolo intestino distale, invadono le cellule epiteliali intestinali (IXC) che la linea di cripte del cieco e del colon prossimale e alla maturazione dei worm rilasciare le uova nell'ambiente ^1. Questo modello è uno strumento potente per esaminare i fattori che controllo CD4 ⁺ T helper (Th) l'attivazione delle cellule così come i cambiamenti a livello dell'epitelio intestinale. La risposta immunitaria che si verifica in ceppi inbred, come C57BL / 6 e BALB / c, è caratterizzato da citochine Th2 polarizzata (IL-4, IL-5 e IL-13) e l'espulsione di vermi, mentre associata citochine Th1 (IL -12, IL-18, IFN-γ) promuovere le infezioni croniche in AKR geneticamente suscettibili / topi J ^2-6. Citochine Th2 promuovere cambiamenti fisiologici nel microambiente intestinale compreso rapido turnover di IXC, la differenziazione delle cellule caliciformi, di reclutamento e cambiamenti della permeabilità epiteliale e la contrazione della muscolatura liscia, che sono stati implicati in espulsione verme ^7-15. Qui dettaglio un protocollo per la propagazione Trichuris uova Muris, che possono essere utilizzati in esperimenti successivi. Forniamo anche un raccolto sperimentale campione con suggerimenti per l'analisi post-infezione. Nel complesso, questo protocollo fornirà ai ricercatori gli strumenti di base per eseguire un mouse Trichuris Muris modello di infezione che può essere utilizzata per affrontare questioni relative alla propensione Th nel tratto gastrointestinale e immunitario funzioni effettrici delle IXC.

Protocollo

1. Moltiplicazione Trichuris uova Muris

1. Per generare nuovi lotti di uova di Trichuris Muris, infettare 20-30 topi immunodeficienti (es. NOD.Cg-Prkdc ^scid Il2rg ^tm1Wjl / SzJ (NSG) o 129S6/SvEvTac-Rag2 ^tm1Fwa (RAG2 ^{- / -))} o topi geneticamente suscettibili ( ad es. AKR / J), che sono 6-8 settimane di età con circa 300 uova di Trichuris Muris mediante sonda gastrica.
2. Dopo 32-35 giorni sacrificare i topi da CO ₂ asfissia.
3. Esporre la parte ventrale del mouse e bagnato l'addome con il 70% di etanolo.
4. Utilizzando pinze afferrare la cute addomin....

Discussione

Questo protocollo dettagli di un elevato standard dose acuta di infezione Trichuris Muris, che può essere modificato come richiesto dallo sperimentatore. Per esempio, i topi possono essere sacrificati e tessuti raccolti in giorni diversi. Per determinare che i topi hanno stabilito con successo pieno carico vermi possono essere sacrificati al giorno 14, momento in cui tutti i mouse dovrebbe portare un peso di circa 200 vermi. I topi possono anche essere infettati per 32 giorni in cui ogni verme rilevato avrà rag.......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Nome del reagente	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Aghi di alimentazione animale (18 x 1 ½ ")	Bottone automatico	7912
Liscio Pinza curva	Roboz	RS-5047
DMEM	Gibco	11965
NOD.Cg-Prkdc scid IL2r gtm1Wjl / SzJ (NSG)	Jackson Laboratories	005557	Questi sono i topi che abbiamo usato, comunque, ogni topi immunodeficienti o ceppo suscettibile dovrebbe funzionare.
RNAlater	Qiagen	76104
2 ml tubi	Axygen	MCT-200-C
Provette da 15 ml	Falco	352096
6 piatti ben	Falco	353046
Paraformaldeide	Microscopia Elettronica Scienza	15710
α-RELMβ anticorpi	Peprotech Inc	0694270Rb