ビブラトームは、コルチ器の哺乳類器官の細胞構築の強化された保全のためセクショニング
Summary
免疫組織化学と共焦点顕微鏡に続くコルチ器官を、切片ビブラトームの簡単な手順が説明されています。この手順では、コルチ器の哺乳類器官の微細な細胞構築の改良保全を可能にし、その結果、細胞の種類を正確に定量することができます。
Abstract
コルチ器の哺乳類の器官はmechanosensory髪とnonsensory支持細胞の高度に秩序化された細胞のモザイクです。
この細胞のモザイクの（1,2でレビュー）。可視化は、多くの場合、コルチ器官は横断面であることが必要です。特に、その核有毛細胞に関してbasally配置されているnonsensory柱とダイテルス"細胞は、、コルチ器官を横断切片のない視覚化できません。しかし、柱とダイテルス"細胞の微細な細胞質プロセスを含むコルチの哺乳類器官のデリケートな細胞構築は、標準的な免疫組織化学的染色技術と互換性のあるようなパラフィンおよび凍結切片のようなルーチン組織学的手続きによって維持することは困難です。
ここでは、共焦点顕微鏡に続く蝸牛、全体のマウントにこれらのビブラトーム切片の免疫組織化学染色の切片ビブラトームで構成されるシンプルかつ堅牢な手順を説明します。この手順は、マウスの肢芽、ゼブラフィッシュの腸、肝臓、膵臓、および心臓（選択された例については3-6を参照）を含む複数の臓器のimmunhistochemical解析に広く用いられている。さらに、この手順では、胚および成体マウス7の両方におけるコルチ器の変異体と制御器官における柱の細胞数のイメージングとquantitificatonの両方の判定に成功した。このメソッドは、しかし、現在広くコルチの哺乳類の器官を調べるために使用されていません。この手順の両方コルチ成人器官の微細な細胞構築の強化された保護を提供し、種々の細胞型の定量化を可能にするために可能性が説明されています。
Protocol
Discussion
免疫組織化学と共焦点イメージングが続くビブラトーム切片、の手順では、最小限の組織損傷とコルチ器官の可視化が可能になります。明らかに、ビブラトームセクションで内部の地域から採取した共焦点画像は固定のアーティファクトによって制限される細胞形態の優れた保全を示しています。このような柱細胞の細胞質の拡張子の区切りなど、時折携帯電話の中断は、（図示せず）が観?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
著者は、アガロースビーズを使用してセクションをマウントするために提案するための共焦点顕微鏡と博士建張のための子供の研究所イメージングコアの使用を承認したいと思います。この作品は、NIHの助成金DC010387によって賄われていた。
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
|---|---|---|---|
| Leica VT1000S Vibrating Blade Microtome | Leica | ||
| Zeiss LSM510 laser scanning confocal microscope | Zeiss | ||
| Student Dumont #5 Forceps | Fine Science Tools | 91150-20 | |
| UltraPure Low Melting Point Agarose | Invitrogen | 16520-050 | |
| Peel-A-Way embedding mold | Polysciences | 18986 or 18646A | |
| bovine serum albumin | Jackson ImmunoResearch | 001-000-162 | |
| Goat Serum | Invitrogen | 16210-064 | |
| S100 | Dako | Z0311 | |
| Alexa Fluor 568 goat anti-rabbit IgG | Invitrogen | A-11036 | 1:1000 dilution |
| Vectashield | Vector Labs | H-1000 | |
| YO-PRO-1 | Invitrogen | Y3603 | |
| vacuum grease | Fisher | S41718 | |
| Affi-Gel Blue Gel | Bio-Rad | 153-7301 |
Riferimenti
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