Den dissektion Tekniken illustrerar urtagning av glaskroppen, näthinnan och linsen från musen ögat, separation genom centrifugering, och karakterisering av protein-analyser.
Medan musen näthinnan har vuxit fram som en viktig genetisk modell för ärftlig näthinnesjukdom förblir musen glaskroppen på att utforskas. Glaskroppen är en mycket vatten extracellulärmatrix överliggande näthinnan där intraokulära samt extraocular proteiner ackumuleras under sjukdomen. 1-3 Onormala interaktioner mellan glaskroppen och näthinnan ligger till grund för flera sjukdomar såsom näthinneavlossning, proliferativ diabetisk retinopati, uveit och proliferativa vitreoretinopathy. 1 , 4 Den relativa musen glaskroppen volym är betydligt mindre än den mänskliga glaskroppen (figur 1), eftersom musen linsen upptar nästan 75% av sitt öga. 5 Detta har gjort biokemiska studier av mus glaskroppen utmanande. I denna video artikeln presenterar vi en teknik för att dissekera och isolera musen glaskroppen från näthinnan, vilket kommer att tillåta användning av transgena musmodeller för att tydligare definiera vilken roll denna extracellulära matrix i utvecklingen av vitreoretinala sjukdomar.
Transgena möss är en viktig modell för att undersöka näthinnan och vitreoretinala sjukdom. 6-10 Musen glaskroppen kroppen, men utgör en betydligt mindre andel av ögat i jämförelse med den mänskliga glaskroppen grund av den stora linsen i musen ögat. 5 Det gör det svårt att isolera och rena musen glaskroppen. Förstå protein förändringar i samband med glaskroppen vid sjukdomar som proliferativ diabetesretinopati, åldersrelaterad makuladegeneration, uveit och näthinneavlossning kommer att ge insikt i de mekanismer genom vilka de framsteg. Detta visualiseras försöksprotokoll ger en möjlighet att få och rena kroppen musen glaskroppen, samtidigt maximera protein avkastningen för enzymatiska och proteomik analyser.
The authors have nothing to disclose.
Finansieringen kom från Fight for Sight och forskning för att förebygga blindhet.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
---|---|---|---|
15°, BD Beaver Microsurgical Blade | Becton-Dickinson | 374881 | |
PBS, pH 7.4 | Invitrogen | 70011-044 | |
0.22 Fine-Castroviejo Suturing Forceps | Storz Ophthalmics | E1805 | |
0.12 Colibri forceps | Storz Ophthalmics | 2/132 | |
Microcon Centrifugal Filter Ultracel YM-100 or YM-50 | Millipore | 42412, 42415 | |
SOD Activity Colorimetric Assay Kit | Abcam | Ab65354 | |
Weck-Cel surgical spears | Medtronic | 0008680 | |
Protease inhibitor cocktail | Roche | 11 836 170 001 | |
Flamingo fluorescent gel stain | Bio-Rad | 161-04910 |