L'analisi quantitativa delle metastasi del cancro utilizzando un modello di aviaria Embryo

Summary

Utilizzando la PCR quantitativa, ci dimostrano come la consolidata pulcino modello CAM può essere utilizzato per analizzare quantitativamente la metastasi di cellule tumorali in organi distanti.

Abstract

Durante le cellule tumorali metastasi disseminare dal tumore primario, invadere i tessuti circostanti, e si diffuse in organi distanti. Metastasi è un processo complesso che può coinvolgere diversi tipi di tessuto, periodi lasso di tempo variabile, e spesso si verificano in profondità all'interno degli organi, rendendo difficile indagare e quantificare. Inoltre, l'efficacia del processo metastatico è influenzato da più passaggi nella cascata metastatica rendendo difficile valutare il contributo di un singolo aspetto del comportamento delle cellule tumorali. Di conseguenza, le analisi sono eseguite frequentemente metastasi negli animali da esperimento per fornire un contesto necessariamente realistica in cui studiare metastasi. Sfortunatamente, questi modelli sono ulteriormente complicata dalla loro fisiologia complessi. L'embrione di pollo è un unico modello in vivo che supera molti limiti allo studio di metastasi, a causa della accessibilità della membrana corioallantoidea (CAM), una buona vascolarizzazione dei tessuti extra-embrionali trova sotto il guscio d'uovo che è ricettivo ai xenotrapianto di cellule tumorali (figura 1). Inoltre, poiché l'embrione di pollo è naturalmente immunodeficienti, il CAM supporta facilmente l'attecchimento dei tessuti normali e tumorali. Soprattutto, il CAM aviaria supporta con successo le caratteristiche delle cellule tumorali tra cui la maggior parte della crescita, invasione, angiogenesi, e il rimodellamento del microambiente. Questo rende il modello particolarmente utile per lo studio delle vie che portano alla metastasi del cancro e di prevedere la risposta del tumore metastatico a nuovi potenziali terapie. La rilevazione di cellule diffusi da specie-specifico Alu PCR permette di valutare quantitativamente metastasi in organi che sono colonizzati da un minimo di 25 celle. Utilizzando la linea di carcinoma epidermoide umano (HEP3) usiamo questo modello per analizzare metastasi spontanea delle cellule tumorali in organi distanti, tra cui il pulcino fegato e polmoni. Inoltre, utilizzando la Alu-PCR protocollo dimostriamo la sensibilità e la riproducibilità del test come strumento per analizzare e quantificare intravasation, arresto, stravaso, e la colonizzazione come singoli elementi di metastasi.

Protocol

1. Preparare le uova di xenotrapianto (metastasi spontanea)

1. Appena deposto uova di gallina fecondate vengono incubate in un incubatore a rotazione per 10 giorni a 100 ° C e 60% di umidità. Le uova sono ruotate quattro volte ogni ora.
2. Il giorno 10 di sviluppo le uova sono posti dalla loro parte in un rack uovo. Una fonte a collo d'oca lampada o un altro leggero adatto è utilizzato per le uova candela facendo brillare la luce nel guscio d'uovo alla fine ottuso dell'uovo dove si trova il airsac.
3. La vena corioallantoidea si trova e segnato. Questa vena è situato nella parte superiore del guscio in cui è la giunzione di diverse grandi vasi s....

Discussion

Il CAM pulcino è stato utilizzato per decenni come sistema modello per studiare vari aspetti della biologia del cancro e nella progressione metastatica. Valutazione principio della capacità metastatica sono stati effettuati in questo modello da una varietà di gruppi, tra cui l'analisi di dormienza (Aguirre Ghiso et al, 1999;. Ossowski e Reich, 1983), rimodellamento dei tessuti (Deryugina et al, 2005;. Hahn-Dantona . et al, 1999), e le metastasi (Zijlstra et al, 2008;. Zijlstra

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Nome del reagente	Azienda	Numero di catalogo	Commenti (opzionale)
1X Dulbecco modificato (DMEM)	Invitrogen	11995073
Dulbecco PBS (D-PBS) (1X), liquido	Invitrogen	14190250	pH 7,4
Tripsina, 0,05% (1X) 4NA con EDTA, liquido	Invitrogen	25300054
Sportsman hatcher	Berry Hill	1550HA	Questi incubatori sono alcuni tra i più facilmente reperibili. Tuttavia, il video mostrerà diverse apparecchiature.
Sportsman incubatore	Berry Hill	1502EA
Dremel utensile rotante	Dremel
Ruote di taglio Dremel no. 36	Dremel	409
Portatile Pipettare aiuti	Pescatore	1368115E
Cotone Tipped Applicatori	Pescatore	23-400-001)
Le uova fecondate	Vari		Molti vendor differenti possono essere utilizzati. Le uova devono essere di circa 35-55 grammi. Le galline che li pone dovrebbe essere compresa tra 36 e 55 settimane di età.
Emocitometro	Hausser scientifico, VWR	15170-090
Fibra ottica microscopio illuminatore	Amscope	HL 250-AY	150W
25 gauge
SYBR Green Extract-N-Amp PCR Tissue Kit	Sigma-Aldrich	XNATRG