Partikel Agglutination Metod för Poliovirus Identification
Summary
En nyligen utvecklat nya partiklar agglutination (PA)-analysen använder molekyl virus receptorn får en snabb och enkel identifiering av poliovirus (PV). I denna artikel kommer vi att visa förfarandet för PA-analysen för PV identifiering.
Abstract
I det globala initiativet att utrota polio, spelar laboratoriediagnos en avgörande roll genom att isolera och identifiera PV från avföringsprov av akut slapp förlamning (AFP) fall. I Världshälsoorganisationen (WHO) Global Polio Laboratory Network, PV isolering och identifiering för närvarande genomförs med hjälp av systemet cellkultur och i realtid RT-PCR, respektive. I den post-utrotning era av PV skulle enkel och snabb identifiering förfaranden vara till hjälp för en snabb bekräftelse på poliofall på nationella laboratorier. I den aktuella studien visar vi förfarandet av nya PA-analysen utvecklats för PV identifiering. Detta PA-analysen utnyttjas samspelet mellan PV-receptorn (PVR) molekyl och virionens som är specifik och enhetlig affinitet till alla serotyper av PV. Proceduren är enkel (ett steg förfarande reaktion plattor) och snabb (resultat kan uppnås inom 2 tim reaktion), och resultatet är visuellt observerade (observation av agglutination av gelatin partiklar).
Protocol
Discussion
Den unika Poängen med denna PA-analysen är utnyttjandet av PVR molekyl i stället för att anti-PV antikroppar för detektion av PV-2. Detta möjliggör en viss interaktion mellan de sensibiliserade gelatin partiklar med PV med en enhetlig affinitet till alla tre serotyper av PV 3-6. Vi använde en immunoadhesin form av PVR (PVR-IgG2a) för sensibilisering av gelatin partiklar, eftersom monomera former av PVR har endast måttlig affinitet till den gemensamma bindningsställe på virionens (dissociationskons…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Vi är tacksamma för att Junko Wada för hennes utmärkta tekniskt bistånd. Vi är tacksamma för Prof. Akio Nomoto för snällt att ge en vektor baculovirus uttryck för PVR-IgG2a. Denna studie har delvis stöd i Grants-i-Stöd för främjande av att utrota polio och forskning om nya och återkommande infektionssjukdomar från ministeriet för hälsa, arbete och välfärd.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
|---|---|---|---|
| Sensitized-gelatin particles | Fujirebio Inc. | Test kit | |
| Reconstitution buffer | Fujirebio Inc. | Test kit | |
| Microtitration plate | Fujirebio Inc. | Test kit | |
| Anti-PV antibody | RIVM |
Riferimenti
- World Health Organization. . Polio Laboratory Manual (4th edition) WHO/IVB/04.10. , (2004).
- Arita, M., Masujima, S., Wakita, T., Shimizu, H. Development of a particle agglutination method with soluble virus receptor for identification of poliovirus. J. Clin. Microbiol. 48, 2698-2702 (2010).
- Bibb, J. A., Witherell, G., Bernhardt, G., Wimmer, E. Interaction of poliovirus with its cell surface binding site. Virology. 201, 107-115 (1994).
- Koike, S. The poliovirus receptor protein is produced both as membrane-bound and secreted forms. Embo J. 9. , 3217-3224 (1990).
- Mendelsohn, C. Transformation of a human poliovirus receptor gene into mouse cells. Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 83, 7845-7849 (1986).
- Mendelsohn, C. L., Wimmer, E., Racaniello, V. R. Cellular receptor for poliovirus: molecular cloning, nucleotide sequence, and expression of a new member of the immunoglobulin superfamily. Cell. 56, 855-865 (1989).
- Arita, M., Koike, S., Aoki, J., Horie, H., Nomoto, A. Interaction of poliovirus with its purified receptor and conformational alteration in the virion. J. Virol. 72, 3578-3586 (1998).
- McDermott, B. M., Rux, A. H., Eisenberg, R. J., Cohen, G. H., Racaniello, V. R. Two distinct binding affinities of poliovirus for its cellular receptor. J. Biol. Chem. 275, 23089-23096 (2000).
- Pipkin, P. A., Wood, D. J., Racaniello, V. R., Minor, P. D. Characterisation of L cells expressing the human poliovirus receptor for the specific detection of polioviruses in vitro. J. Virol. Methods. 41, 333-340 (1993).
- Avoort, H. G. v. a. n. d. e. r. Comparative study of five methods for intratypic differentiation of polioviruses. J. Clin. Microbiol. 33, 2562-2566 (1995).
- Kilpatrick, D. R. Rapid group-, serotype-, and vaccine strain-specific identification of poliovirus isolates by real-time reverse transcription-PCR using degenerate primers and probes containing deoxyinosine residues. J. Clin. Microbiol. 47, 1939-1941 (2009).
