קשירת Cecal נקר נוהל
Summary
במודל עכבר של קשירת לנקב cecal ו ככלי רב ערך לחקר אלח דם האדם.
Abstract
אלח דם האדם מאופיין על ידי סדרה של תגובות מערכתיות בתגובה זיהום אינטנסיבי מאסיבי שלא הצליחו להיכלל באופן מקומי על ידי המארח. נכון לעכשיו, אלח דם מדרג בין עשרת הגורמים העליון של התמותה ביחידות טיפול נמרץ ארה"ב 1. במהלך אלח דם ישנם שני שלבים haemodynamic נקבע כי עשויים לחפוף. השלב הראשוני (hyperdynamic) מוגדר ייצור מסיבי של ציטוקינים מעודדי דלקת ו מינים החמצן מגיב על ידי מאקרופאגים נויטרופילים המשפיעה על החדירות של כלי הדם (המוביל תת לחץ דם), תפקוד הלב וגורם לשינויים מטבוליים שהגיעה לשיאה נמק רקמות כשל איברים. כתוצאה מכך, הגורם השכיח ביותר לתמותה היא פגיעה כליות חריפה. השלב השני (hypodynamic) הוא תהליך אנטי דלקתיות מעורבים אנטיגן שינו במצגת מונוציטים, ירידה ריבוי לימפוציטים ועל התפקוד אפופטוזיס מוגבר. מצב זה המכונה החיסון או דיכאון החיסונית בחדות מעלה את הסיכון לזיהומים nocosomial ובסופו של דבר, למוות. מנגנונים של תהליכים אלה pathophysiological לא מאופיינים היטב. מכיוון שגם השלבים של אלח דם עלול לגרום לנזק בלתי הפיך וחסר תקנה, זה הכרחי על מנת לקבוע את מעמדם החיסונית הפיזיולוגי של המטופל. זו הסיבה העיקרית מדוע תרופות טיפוליות רבות נכשלו. התרופה ניתנה אותו בשלבים שונים של אלח דם עלול להיות מזיק או טיפולית אחרת או אין השפעה 2,3. אלח דם כדי להבין ברמות שונות חשוב מאוד להיות מודל החיה מתאימה ומקיפה שמעתיק את המסלול הקליני של המחלה. חשוב לאפיין את מנגנוני pathophysiological המתרחשים במהלך אלח דם ושליטה התנאים מודל לבדיקה סוכני טיפולית פוטנציאליים.
כדי לחקור את האטיולוגיה של חוקרים אלח דם האדם פיתחו מודלים של בעלי חיים שונים. המודל הקליני הנפוץ ביותר הוא קשירת לנקב cecal ו (CLP). המודל CLP מורכב ניקוב של cecum המאפשר שחרור של חומר צואתי לתוך חלל הצפק כדי לייצר תגובה חיסונית החריפה הנגרמת על ידי זיהום polymicrobial. מודל זה ממלא את המצב האנושי שהוא רלוונטי מבחינה קלינית. כמו אצל בני אדם, עכברים לעבור CLP עם החייאה נוזל להראות את השלב הראשון (מוקדם) hyperdynamic כי בזמן התקדמות לשלב (ז"ל) שנית hypodynamic. בנוסף, ציטוקינים פרופיל דומה לזה לראות אלח דם האדם, שם הוא גדל אפופטוזיס הלימפוציטים (הנסקרת ב 4,5). בשל מנגנונים מרובים חופפים מעורב אלח דם, החוקרים צריכים מודל אלח דם מתאים לחומרת מבוקר כדי להשיג תוצאות עקביות לשחזור.
Protocol
Discussion
כאן אנחנו מראים בפירוט כיצד לבצע את מודל CLP בעכברים לווסת את כיתה של חומרה.
בהשוואה במודלים של בעלי חיים אחרים של אלח דם, CLP ניתן לבצע כל זן של העכבר גיל, מין שונות. זהו הליך ניתוחי קל יחסית ולא יקר. במודל זה, הציון של חומרה יש השפעה יש…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
עבודה זו נתמכה על ידי מענק מטעם משרד הבריאות של פנסילבניה.
ד"ר מיגל גרסיה Toscano היה בחור דוקטורט באוניברסיטת טמפל, שמומן על ידי אלפונסו מרטין Escudero הקרן במהלך מחקר זה.
אנו רוצים להודות איליה Yordanov וקווין Kotredes לביצוע של הווידאו.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
|---|---|---|---|
| Ketamine | Ketaset | 0856-2013-01 | |
| Xylazine | AnaSed | NADA# 139-236 | |
| Insulin syringe 29G | Exel | 26028 | |
| Silk suture, 6-0 PROLENE | Ethicon | 8680G | |
| 19G and 25G Needle | BD | 305186 | |
| Shaver | General supply | General supply | |
| Infrared Heating lamp | General supply | General supply | |
| Michel wound clips 7mm | Roboz Surgical Instr | RS-9270 | |
| Ear Loop Mask | Fisher Scientific | 19-130-4181 | |
| Dissection scissors | Roboz Surgical Instr | RS-6702 | |
| Betadine solution | VWR | 63410-992 | |
| Surgical forceps | Roboz Surgical Instr | RS-5135 | |
| 70% Isopropyl alcohol pad | Fisher Scientific | 22-031-350 | |
| Buprenorphine | Bedford Labs | 55390-100-10 | |
| Tramadol | Sigma-Aldrich | 42965 |
Riferimenti
- Angus, D. C. Epidemiology of severe sepsis in the United States: analysis of incidence, outcome, and associated costs of care. Crit Care Med. 29, 1303-1310 (2001).
- Riedemann, N. C., Guo, R. F., Ward, P. A. The enigma of sepsis. J Clin Invest. 112, 460-467 (2003).
- Eichacker, P. Q., Gerstenberger, E. P., Banks, S. M., Cui, X., Natanson, C. Meta-analysis of acute lung injury and acute respiratory distress syndrome trials testing low tidal volumes. Am J Respir Crit Care Med. 166, 1510-1514 (2002).
- Buras, J. A., Holzmann, B., Sitkovsky, M. Animal models of sepsis: setting the stage. Nat Rev Drug Discov. 4, 854-865 (2005).
- Doi, K., Leelahavanichkul, A., Yuen, P. S., Star, R. A. Animal models of sepsis and sepsis-induced kidney injury. J Clin Invest. 119, 2868-2878 (2009).
- Godshall, C. J., Scott, M. J., Peyton, J. C., Gardner, S. A., Cheadle, W. G. Genetic background determines susceptibility during murine septic peritonitis. J Surg Res. 102, 45-49 (2002).
- De Maio, A., Torres, M. B., Reeves, R. H. Genetic determinants influencing the response to injury, inflammation, and sepsis. Shock. 23, 11-17 (2005).
- Diodato, M. D., Knoferl, M. W., Schwacha, M. G., Bland, K. I., Chaudry, I. H. Gender differences in the inflammatory response and survival following haemorrhage and subsequent sepsis. Cytokine. 14, 162-169 (2001).
- Turnbull, I. R. Effects of age on mortality and antibiotic efficacy in cecal ligation and puncture. Shock. 19, 310-313 (2003).
- Miyaji, T. Ethyl pyruvate decreases sepsis-induced acute renal failure and multiple organ damage in aged mice. Kidney Int. 64, 1620-1631 (2003).
- Torres, M. B., De Maio, A. An exaggerated inflammatory response after CLP correlates with a negative outcome. J Surg Res. 125, 88-93 (2005).
- Doi, K. AP214, an analogue of alpha-melanocyte-stimulating hormone, ameliorates sepsis-induced acute kidney injury and mortality. Kidney Int. 73, 1266-1274 (2008).
- Wilson, M. A. Fluid resuscitation attenuates early cytokine mRNA expression after peritonitis. J Trauma. 41, 622-627 (1996).
- Zanotti-Cavazzoni, S. L. Fluid resuscitation influences cardiovascular performance and mortality in a murine model of sepsis. Intensive Care Med. 35, 748-754 (2009).
- Hugunin, K. M., Fry, C., Shuster, K., Nemzek, J. A. Effects of tramadol and buprenorphine on select immunologic factors in a cecal ligation and puncture model. Shock. 34, 250-260 (2010).
