Windowing Ovos de galinha para Estudos do Desenvolvimento
Summary
A facilidade de acesso do embrião tem permitido experimentos para mapear destinos célula usando várias abordagens, incluindo pintinho de codorna quimeras e rotulagem corante focal. Neste artigo vamos demonstrar um método de preparação de ovo que foi otimizado para os tempos de sobrevivência a longo.
Abstract
O estudo do desenvolvimento foi muito facilitada pelo uso do embrião de galinha como modelo experimental. A facilidade de acesso do embrião tem permitido experimentos para mapear destinos célula usando várias abordagens, incluindo pintinho de codorna quimeras e rotulagem corante focal. Além disso, permite a perturbações molecular de vários tipos, incluindo a colocação de proteína revestido contas ea introdução de DNA plasmídeo usando em eletroporação in ovo. Esses experimentos produziram dados importantes sobre o desenvolvimento dos sistemas nervoso central e periférico. Para muitos desses estudos, é necessário para abrir a casca de ovo e religar-lo sem perturbar o crescimento do embrião. O embrião pode ser examinada em sucessivos estágios de desenvolvimento de re-abertura da casca de ovo. Apesar de existirem vários métodos excelentes para a abertura de ovos de galinha, neste artigo vamos demonstrar um método que foi otimizado para o tempo de sobrevivência longa. Neste método, o óvulo fica do seu lado e uma pequena janela é cortado no shell. Após o procedimento experimental, a casca é usada para cobrir o ovo para a duração do seu desenvolvimento. Fita plástica que recobre a casca do ovo protege o embrião e ajuda a manter a hidratação durante o restante do período de incubação. Este método tem sido utilizado início em dois dias de incubação e permitiu a sobrevivência através madura idades embrionárias.
Protocol
Discussion
Este método permite a sobrevivência a longo vezes seguintes manipulações experimentais. Por exemplo, tintura de rotulagem estudos permitiram a sobrevivência de E10 ou mais tarde, em um estudo de mapeamento de destino (1). Além disso, ela tem sido usada para estudos de eletroporação in ovo que fornecem alteração dos níveis de expressão de genes e desenvolvimento necessário para avançar para estágios mais avançados de desenvolvimento (2-6). Esta técnica de janelas pode ser usado em combinação com qualquer procedimento que r…
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Rotating incubator | Profi | Maintain at 37° Degrees with relative humidity set above 60% | ||
| 70 % EtOH | ||||
| gauze | ||||
| 3M plastic tape | ||||
| 10cc syringe | 1/egg | |||
| 18G needles | 1½ inch needle, 1/syringe | |||
| Dissection scissors | 4″ sharp straight blades | |||
| Fertilized Eggs |
Riferimenti
- Cramer, K. S., Fraser, S. E., Rubel, E. W. . Dev Biol. 224, 138-151 (2000).
- Cramer, K. S., Bermingham-McDonogh, O., Krull, C. E., Rubel, E. W. . Dev Biol. 269, 26-35 (2004).
- Cramer, K. S., Cerretti, D. P., Siddiqui, S. A. . Dev Biol. 295, 76-89 (2006).
- Huffman, K. J., Cramer, K. S. . Dev Neurobiol. 67, 1655-1668 (2007).
- Krull, C. E. . Dev Dyn. 229, 433-439 (2004).
- Gerlach-Bank, L. M., Cleveland, A. R., Barald, K. F. . Dev Dyn. 229, 219-230 (2004).
