筋萎縮性側索硬化症や外傷性脊髄損傷では頚椎前角をターゲットとするための髄腔内細胞移植
Summary
神経前駆体の移植は、保護および/または脊髄損傷（SCI）と運動ニューロン疾患、筋萎縮性側索laterals硬化症（ALS）で失われた/機能不全子宮頸部横隔運動ニューロンを交換するための有望な戦略である。我々は、ALSとSCIの齧歯類モデルにおける頚髄前角に細胞送達のためのプロトコルを提供しています。
Abstract
横隔運動ニューロンの損失に起因する呼吸障害は、人間の外傷性脊髄損傷の大部分（SCI）症例1の衰弱の結果であり、運動ニューロン疾患、筋萎縮性側索laterals硬化症（ALS）2患者の最終的な死亡原因です。
ALSは上位と下位運動ニューロンの比較的急速な変性によって特徴付けられる壊滅的な神経疾患です。ために振動板3の横隔運動ニューロンのinnnervationの損失による呼吸麻痺の診断を以下の平均2-5年で病気に最終的に屈するの患者。 10％が家族性のものである間、ほとんどの場合は、散発的です。家族性症例の約20％は21番染色体4上のCu / Znスーパーオキシドジスムターゼ1（SOD1）遺伝子の様々な点変異にリンクされています。運動ニューロンの損失の他の動物モデルが存在するにもかかわらず、現在の病気の最もよく使用されるモデルである4,5およびラット6運ぶ変異型ヒトSOD1遺伝子（G93A、G37R、G86R、G85R）が生成されている、そして、トランスジェニックマウス。
脊髄損傷（SCI）は、機能的転帰が負傷7種類、場所と重大度に応じて変化させると、物理的な外傷から脊髄に生じる条件の異種のセットです。それにもかかわらず、人間のSCIの症例の約半数が降順延髄の呼吸器系の軸索は1〜横隔運動ニューロンの損失と負傷に起因する衰弱性呼吸機能不全の結果、子宮頸部の領域に影響を与えます。 SCIの動物モデルの数は、最も一般的に使用し、臨床的に意義のある挫傷8であると、開発されている。
神経前駆細胞のさまざまなクラス（NPCに）の移植がため、紛失したり、機能不全のCNSの細胞型を交換する神経保護作用を提供し、遺伝子因子を提供する能力が、ALSとSCIを含む外傷性中枢神経系の損傷や神経変性の治療のための有望な治療戦略である関心9。
ALSとSCIの両方の動物モデルは、横隔運動ニューロンの消失とそれに伴う呼吸障害10,11を含むこれらの疾患の多くは臨床的に意義のある側面を、モデル化できます。 ALSとSCIのこれらの動物モデルで呼吸機能上のNPCをベースとした戦略の有効性を評価するために、細胞の介入は、具体的には横隔運動ニューロンなどの治療に関連したターゲットを含む地域に向けられなければならない。我々はそのようなSOD1 G93Aマウスやラットなどの神経変性モデルの頸部脊髄腹側灰白質だけでなく、脊髄損傷のラットおよびマウス11にNPCのマルチセグメント、脊髄移植のための詳細なプロトコルを提供しています。
Protocol
の方法 1。細胞の準備例として、我々はこのために細胞型との経験の移植のためにグリア前駆細胞12を調製するための手順を説明します。しかし、例えば、トリプシンの培地および使用を含むプロトコルの詳細は、移植のために使用されている特定の細胞型に依存します。 ℃の水浴中で37.0に予熱するすべてのソリューション。 HB…
Discussion
SOD1 G93Aマウスとラットを対象とした研究のため、年齢やグループ内での動物の性別と一致し、異なるグループに同じゴミの中で動物を配布する。それは、病気のプロセスは、男性と女性の間で異なる可能性があるため、ALSとSCIモデルの両方で同じ性別からすべての動物を用いることが好ましいが、それはまた可能性特異的な効果を検出するために、両性から十分な動物があると便利?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
私は感謝したい：ルポールのすべてのメンバー、Maragakisと役に立つ議論のためのロススタインラボ、アメリカと資金調達のためのクレイグH.ニールセン財団の麻痺した退役軍人。
Materials
| Name of reagent | Company | Catalog number |
| HBSS | Gibco | 14170 |
| 0.05% Trypsin | Gibco | 25300 |
| Soybean Trypsin Inhibitor (optional) | Sigma | T-6522 |
| Acepromazine maleate (0.7 mg/kg) | Fermenta Animal Health | |
| Ketamine (95 mg/kg) | Fort Dodge Animal Health | |
| Xylazine (10 mg/kg) | Bayer | |
| #11 Feather surgical blade | Electron Microscopy Sciences | 72044-11 |
| Cotton-tipped applicators (6 inch) | Fisher | 23-400-101 |
| Rat-toothed forceps | Fine Science Tools | Rat: 11023-15; Mouse: 11042-08 |
| Medium-sized spring scissors | Fine Science Tools | 15012-12 |
| Mini spring scissors | Fine Science Tools | 15000-10 |
| Rongeur | Fine Science Tools | Rat: 16121-14; Mouse: 16221-14 |
| Microknife | Fine Science Tools | 10056-12 |
| Needle holders | Fine Science Tools | 12502-14 |
| Suture: 4-0 | Vicryl | S-183 |
| Staples: 9 mm | Autoclip | 427631 |
| Stapler: 9 mm (Reflex #203-1000) | World Precision Instruments | 5000344 |
| Warm water pump (T/Pump) | Gaymar | P/N 07999-000 |
| Cyclosporin A: 250.0 mg/5.0 mL ampules | Novartis/Sandimmune | NDC 0078-0109-01 |
| FK-506 | LC Laboratories | F-4900 |
| Rapamycin | LC Laboratories | R-5000 |
| Injector | World Precision Instruments | UMP2 |
| Micro 4 Microsyringe Pump Controller | World Precision Instruments | UMC4 |
| Micromanipulator | World Precision Instruments | Kite-R |
| 10.0 μL Hamilton syringe | Hamilton | 80030 |
| Hamilton needles: 33-gauge, 45° bevel, 1 inch | Hamilton | 7803-05 |
| Glass 20.0 μL microcapillary pipettes (optional) | Kimble | 71900-20 |
Riferimenti
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Citazione di questo articolo
Lepore, A. C. Intraspinal Cell Transplantation for Targeting Cervical Ventral Horn in Amyotrophic Lateral Sclerosis and Traumatic Spinal Cord Injury. J. Vis. Exp. (55), e3069, doi:10.3791/3069 (2011).