अर्ली स्टेज चिकन भ्रूण पर ग्रोथ फैक्टर लेपित मोती दे
Summary
वृद्धि कारक है और प्रोटीन की एक किस्म करने के लिए कोशिकाओं के विकास के दौरान विभिन्न सेल भाग्य पर लेने के लिए प्रेरित बातचीत. यहाँ हम ओवो तैयारी में उपयोग E2.5 लड़की भ्रूण पर मोती रखकर विकास में विभिन्न प्रोटीन के बीच बातचीत संभव पते प्रदर्शित करता है.
Abstract
न्यूरल ट्यूब विकास के दौरान विशिष्ट spatiotemporal पैटर्न में कई प्रोटीन व्यक्त करता है. ये प्रोटीन सेल भाग्य दृढ़ संकल्प, सेल प्रवास, और तंत्रिका सर्किट के गठन के लिए महत्वपूर्ण हो दिखाया गया है. Neuronal प्रेरण और patterning हड्डी morphogenetic प्रोटीन (BMP), ध्वनि हाथी (श), fibroblast वृद्धि कारक (FGF), दूसरों के बीच में शामिल है. विशेष रूप से, Fgf8 की अभिव्यक्ति पैटर्न BMP4 और श व्यक्त क्षेत्रों के लिए करीब निकटता में है. इस अभिव्यक्ति पैटर्न विकास कि बातचीत telencephalon में patterning की सुविधा के साथ संगत है.
यहाँ हम एक विधि है जिसमें एक ओवो तैयारी में अग्रमस्तिष्क के गठन में Fgfs के प्रभाव का परीक्षण करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है एक दृश्य प्रदर्शन प्रदान करते हैं. मोती प्रोटीन के साथ लेपित हैं और विकासशील न्यूरल ट्यूब में रखा निरंतर जोखिम प्रदान करते हैं. क्योंकि प्रक्रिया छोटे, ध्यान रखा मनकों का उपयोग करता है, यह न्यूनतम इनवेसिव है और इसके कई मोतियों एक एकल न्यूरल ट्यूब के भीतर रखा जा की अनुमति देता है है. इसके अलावा, विधि निरंतर विकास के लिए इतना है कि भ्रूण की अनुमति देता है है एक अधिक परिपक्व स्तर पर विश्लेषण किया जा सकता है है शरीर रचना विज्ञान और तंत्रिका patterning में परिवर्तन का पता लगाने. इस सरल लेकिन उपयोगी प्रोटोकॉल वास्तविक समय इमेजिंग के लिए अनुमति देता है. यह एक spatially और अस्थायी अंतर्जात प्रोटीन के स्तर तक ही सीमित परिवर्तन बनाने का मतलब है प्रदान करता है.
Protocol
Discussion
प्रोटीन आप उपयोग करना चाहते हैं हैं पर निर्भर करता है, वहाँ कैसे तैयार करने के लिए मनकों पर अलग प्रोटोकॉल रहे हैं. इन प्रयोगों में, हम हेपरिन ऐक्रेलिक मोती का उपयोग करें, लेकिन Affi – जेल मोती भी इस्तेमाल किया जा सकत…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Eggs | Animal | Fertilized, E2-2.5 (~ St. 17 HH) | ||
| Incubator | Profi-I | Lyon | ||
| India Ink | Tool | Higgins | Prepare a 4% solution in sterile PBS. | |
| Sterile PBS | Alternatively, an antibody cocktail can be used | |||
| 1ml syringe | ||||
| 27G 1/2 needles | Tool | BD | 305109 | Angled at 90 degrees |
| Forceps | Tool | World Precision Instruments | size 55 | |
| Hemostats | ||||
| Dissection scissors | Tool | World Precision Instruments | 500086 | vannas, 8.5cm |
| Parafilm tape | to seal eggs | |||
| Tungsten Probe | Tool | Electron Microscopy Sciences | 62091 | Tool #24. Handle optional. |
Riferimenti
- Korn, M. J., Cramer, K. S. Windowing Chicken Eggs for Developmental Studies. Jounal of Visualized Experiments. 8, (2007).
- Crossley, P. H., Martinez, S., Ohkubo, Y., Rubenstein, J. L. Coordinate expression of Fgf8, Otx2, Bmp4, and Shh in the rostral prosencephalon during development of the telencephalic and optic vesicles. Neuroscienze. 108, 183-206 (2001).
- Alexandre, P., Bachy, I., Marcou, M., Wassef, M. Positive and negative regulations by FGF8 contribute to midbrain roof plate developmental plasticity. Development . 133, 2905-2913 (2006).
