초기 치킨 태아의 성장 팩터 - 코팅 비즈 배치
Summary
성장 요인과 단백질의 다양한 세포가 개발하는 동안 다른 세포 운명을 맡을 유도하는 상호 작용. 여기 E2.5 여자의 배아에 구슬을 배치하여 개발에 서로 다른 단백질 간의 상호 작용 가능성을 해결하기 위해 비켜 준비의 사용을 보여줍니다.
Abstract
신경 튜브 개발하는 동안 특정 spatiotemporal 패턴에 많은 단백질을 표현하고 있습니다. 이러한 단백질은 세포 운명 결정, 세포 마이 그 레이션 및 신경 회로 형성을 위해 중요한 것으로 표시되었습니다. 의 연결을 유도하고 patterning 다른 사람 사이에 뼈 morphogenetic 단백질 (BMP), 소닉 헤지 호그 (쉬이잇), fibroblast의 성장 인자 (FGF)를 포함. 특히, Fgf8의 표현 패턴 BMP4 및 쉿 표현 지역 가까이에 있습니다. 이 표현식 패턴은 telencephalon의 patterning을 촉진 발달 상호 작용과 일치합니다.
우리가 비켜 준비가 forebrain의 형성에 Fgfs의 효과를 테스트하는 데 사용할 수있는 방식의 시각적 데모를 제공합니다. 비즈는 단백질로 코팅하고 지속적인 노출을 제공하는 개발 신경 튜브에 배치됩니다. 절차는 작고, 신중하게 배치 구슬을 사용하기 때문에, 그것은 법으로서 여러 구슬이 하나의 신경 튜브 내에 배치 수 있습니다. 배아는 해부학과 신경 patterning의 변화를 감지하는보다 성숙한 단계에서 분석할 수 있도록 또한, 방법은 지속적인 발전을 위해 수 있습니다. 이 간단하지만 유용한 프로토콜은 실시간으로 영상을 허용합니다. 그것은 내생 단백질 수준에 공간과 temporally 제한을 변경할 수있는 수단을 제공합니다.
Protocol
Discussion
사용하고자하는 단백질에 따라 구슬을 준비하는 방법에 대한 다른 프로토콜이 있습니다. 이 실험에서, 우리는 헤파린 – 아크릴 구슬을 사용하지만 affi – 겔 비즈도 사용할 수 있습니다. 우리는 헤파린 – 아크릴 구슬은 알부민 계란의 수성 환경에서 조작하기 쉽게 것으로 나타났습니다. 비즈 4 ° C.에서 하룻밤 단백질의 5리터에 적셔 놓은 거지 제어 구슬은 배치의 시간까지 멸균 PBS에 배치됩니다. 비켜 준비를 사용…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Eggs | Animal | Fertilized, E2-2.5 (~ St. 17 HH) | ||
| Incubator | Profi-I | Lyon | ||
| India Ink | Tool | Higgins | Prepare a 4% solution in sterile PBS. | |
| Sterile PBS | Alternatively, an antibody cocktail can be used | |||
| 1ml syringe | ||||
| 27G 1/2 needles | Tool | BD | 305109 | Angled at 90 degrees |
| Forceps | Tool | World Precision Instruments | size 55 | |
| Hemostats | ||||
| Dissection scissors | Tool | World Precision Instruments | 500086 | vannas, 8.5cm |
| Parafilm tape | to seal eggs | |||
| Tungsten Probe | Tool | Electron Microscopy Sciences | 62091 | Tool #24. Handle optional. |
Riferimenti
- Korn, M. J., Cramer, K. S. Windowing Chicken Eggs for Developmental Studies. Jounal of Visualized Experiments. 8, (2007).
- Crossley, P. H., Martinez, S., Ohkubo, Y., Rubenstein, J. L. Coordinate expression of Fgf8, Otx2, Bmp4, and Shh in the rostral prosencephalon during development of the telencephalic and optic vesicles. Neuroscienze. 108, 183-206 (2001).
- Alexandre, P., Bachy, I., Marcou, M., Wassef, M. Positive and negative regulations by FGF8 contribute to midbrain roof plate developmental plasticity. Development . 133, 2905-2913 (2006).
