Erken Evre Tavuk Embriyolar Büyüme Faktörü-Kaplı Boncuk yerleştirme
Summary
Çeşitli büyüme faktörleri ve proteinler, hücre gelişimi sırasında farklı hücre kaderi almaya ikna etmek için etkileşim. Burada E2.5 civciv embriyolarının boncuk koyarak gelişimin farklı proteinler arasındaki etkileşimleri adresine ovo hazırlanmasında kullanımı göstermektedir.
Abstract
Nöral tüp gelişimi sırasında özel Spatiotemporal desen birçok proteinleri ifade eder. Bu proteinler, hücre kaderinin belirlenmesi, hücre göçü ve nöral devrelerin oluşumu için kritik olduğu gösterilmiştir. Nöronal indüksiyon ve desenlendirme, diğerlerinin yanı sıra, kemik morfogenetik proteini (BMP), sonik kirpi (SSH), fibroblast büyüme faktörü (FGF), içerir. Özellikle, Fgf8 ifade deseni BMP4 ve SSH ifade bölgelere yakınlığı. Bu ifade, desen telencephalon desenlendirme kolaylaştırmak gelişimsel etkileşimler ile tutarlıdır.
Burada bir yöntem ovo hazırlık önbeyin oluşumunu FGFs etkilerini test etmek için kullanılabilir hangi bir görsel gösteri sağlar. Boncuk protein ile kaplı ve sürekli maruz kalma sağlamak için gelişmekte olan nöral tüp yerleştirilir. Prosedürü, küçük, özenle yerleştirilen boncuklar kullandığı için, bu minimal invaziv ve çeşitli boncuk tek bir nöral tüp içinde yerleştirilmesini sağlar. Ayrıca, yöntem embriyolar, daha olgun bir aşamada anatomi ve sinir dokusunda değişiklikleri belirlemek için analiz edilebilir, böylece sürekli gelişimi için olanak sağlar. Bu basit ama kullanışlı bir protokol gerçek zamanlı görüntüleme için izin verir. Endojen protein düzeyleri mekansal ve zamansal olarak sınırlı değişiklikler yapmak için bir araç sağlar.
Protocol
Discussion
Kullanmak istediğiniz protein bağlı, boncuklar nasıl hazırlamak için farklı protokoller vardır. Bu deneylerde, heparin-akrilik boncuk, ancak Affi-jel boncuklar da kullanılabilir. Biz heparin akrilik boncuk, albümin, yumurta, sulu bir ortamda işlemek için kolay olduğunu bulduk. Boncuk 4 ° C'de gece protein 5 l batırılmış Kontrol boncuklar yerleştirme zamanına kadar steril PBS yerleştirilir. Ovo hazırlanmasında kullanarak avantaj embriyo hala hayatta ve normalde 1 geliştirmek için ücretsiz olmasıdır….
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Eggs | Animal | Fertilized, E2-2.5 (~ St. 17 HH) | ||
| Incubator | Profi-I | Lyon | ||
| India Ink | Tool | Higgins | Prepare a 4% solution in sterile PBS. | |
| Sterile PBS | Alternatively, an antibody cocktail can be used | |||
| 1ml syringe | ||||
| 27G 1/2 needles | Tool | BD | 305109 | Angled at 90 degrees |
| Forceps | Tool | World Precision Instruments | size 55 | |
| Hemostats | ||||
| Dissection scissors | Tool | World Precision Instruments | 500086 | vannas, 8.5cm |
| Parafilm tape | to seal eggs | |||
| Tungsten Probe | Tool | Electron Microscopy Sciences | 62091 | Tool #24. Handle optional. |
Riferimenti
- Korn, M. J., Cramer, K. S. Windowing Chicken Eggs for Developmental Studies. Jounal of Visualized Experiments. 8, (2007).
- Crossley, P. H., Martinez, S., Ohkubo, Y., Rubenstein, J. L. Coordinate expression of Fgf8, Otx2, Bmp4, and Shh in the rostral prosencephalon during development of the telencephalic and optic vesicles. Neuroscienze. 108, 183-206 (2001).
- Alexandre, P., Bachy, I., Marcou, M., Wassef, M. Positive and negative regulations by FGF8 contribute to midbrain roof plate developmental plasticity. Development . 133, 2905-2913 (2006).
