Laser capture microdissectie van weefsel van zoogdieren

Abstract

Laser capture microscopie, ook wel bekend als laser microdissectie (LMD), kan de gebruiker te isoleren kleine aantallen van cellen of weefsels die bevroren of in formaline gefixeerde, in paraffine ingebedde weefselcoupes. LMD technieken baseren zich op een thermo labiele membraan ofwel bovenaan geplaatst, of onder, het weefsel sectie. In een methode, is gericht laser energie die wordt gebruikt om het membraan smelten op de onderliggende cellen, die vervolgens kunnen worden opgeheven van het weefsel sectie. In de andere, de laser-energie verdampt de folie langs een pad "getrokken" op het weefsel, waardoor de geselecteerde cellen te vallen in een verzameling apparaat. Elke techniek maakt het mogelijk de selectie van cellen met een minimale resolutie van enkele microns. DNA, RNA, eiwit en lipide monsters kunnen worden geïsoleerd en geanalyseerd van micro-ontleed monsters. In deze video, tonen we het gebruik van de Leica AS-LMD laser microdissection instrument in zeven segmenten, waaronder een kennismaking met de beginselen van de LMD, het initialiseren van het instrument voor gebruik, algemene overwegingen voor monstervoorbereiding, montage het monster en het opzetten van vast te leggen buizen , het uitlijnen van de microscoop, het aanpassen van de controles vast te leggen, en het vastleggen van weefselmonsters. Laser-capture micro-dissectie kan de onderzoeker om monsters van de zuivere celpopulaties zo klein isoleren als een enkele cel-equivalenten. Hierdoor kan de analyse van cellen van belang die vrij zijn van naburige verontreinigingen, die kunnen verwarren experimentele resultaten.