Microfabricated (mPADs) पोस्ट सरणी डिटेक्टरों: एक यांत्रिक बलों पृथक दृष्टिकोण
Summary
इस वीडियो में, हम प्रदर्शन कैसे बनाना और microfabricated पोस्ट सरणी (mPADs) डिटेक्टरों सेलुलर सिकुड़ना के modulations का आकलन करने का उपयोग.
Abstract
इस वीडियो में, हम हमारे दृष्टिकोण पेश करने के लिए सेलुलर कर्षण पदों की एक microfabricated सरणी का उपयोग बलों उपाय करेंगे. ट्रैक्शन बलों मायोसिन-actin बातचीत के माध्यम से उत्पन्न कर रहे हैं और हमारे शरीर क्रिया विज्ञान में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं. विकास के दौरान, वे कोशिकाओं को एक स्थान से क्रम में करने के लिए अगले स्थानांतरित करने के लिए ऊतक के जल्दी संरचनाओं फार्म में सक्षम. ट्रैक्शन बल चिकित्सा प्रक्रियाओं में मदद करते हैं. वे घाव के समुचित बंद या प्रवास और हमारे शरीर के माध्यम से leukocytes के रेंगने के लिए आवश्यक हैं. ये वही बलों कैंसर मेटास्टेसिस या एक ट्यूमर की ओर संवहनी वृद्धि के मामले में हमारे स्वास्थ्य के लिए हानिकारक हो सकता है. सबसे आम तरीका है जिसके द्वारा इन विट्रो में कोशिकाओं का अध्ययन करने के लिए एक गिलास या polystyrene पकवान का उपयोग करने के लिए किया गया है. हालांकि, substrates की कठोरता यह असंभव शारीरिक रूप से सेल कर्षण बलों को मापने के लिए बनाता है, और वहाँ अपेक्षाकृत कुछ तरीकों कर्षण बलों का अध्ययन कर रहे हैं. हमारी प्रयोगशाला इन सीमाओं को पार करने के लिए तकनीक विकसित की है. विधि लचीला cantilevers, कठोरता और आकार पैमाने जिनमें से ऐसी है कि व्यक्ति की कोशिकाओं के कई cantilevers भर में फैले हैं और उन्हें इस प्रक्रिया में मोड़ना का एक अनुलंब सरणी पर आधारित है. स्तंभों का उपयोग हम व्यास में 3 सुक्ष्ममापी, 10 सुक्ष्ममापी लंबा, और 9 सुक्ष्ममापी रिक्ति केंद्र के लिए केंद्र के साथ एक नियमित सरणी में विन्यस्त कर रहे हैं. लेकिन इन शारीरिक आयाम के अध्ययन की एक किस्म को समायोजित करने के लिए आसानी से किया जा विविध कर सकते हैं. हम एक सिलिकॉन मास्टर के साथ शुरू है, लेकिन अंतिम पोस्ट (डाइमिथाइल siloxane) नामक पाली, या PDMS सिलिकॉन रबर का बना रहे हैं. हम एक खुर्दबीन के नीचे deflections को मापने के लिए और परिमाण और कर्षण मनाया deflections उत्पादन के लिए आवश्यक बलों की दिशा की गणना कर सकते हैं. हम इन substrates के बाद सरणी डिटेक्टरों, या mPADs microfabricated कहते हैं. यहाँ, हम आपको दिखाने के लिए हम कैसे बनाना और mPADs का उपयोग करने के लिए सेलुलर सिकुड़ना के modulations का आकलन करेंगे.
Protocol
Riferimenti
- Tan, J. L., Tien, J., Pirone, D., Gray, D. S., Chen, C. S. Cells lying on a bed of microneedles: An approach to isolate mechanical force. Proc Nat Acad Sci USA. 100, 1484-1489 (2003).
- Sniadecki, N. J., Chen, C. S., Wang, Y. L., Discher, D. E. Microfabricated Silicone Elastomeric Post Arrays for Measuring Traction Forces of Adherent Cells. Methods in Cell Biology – Cell Mechanics. 83, 313-328 (2007).
- Lemmon, C. A., Sniadecki, N. J., Ruiz, S. A., Tan, J. T., Romer, L. H., Chen, C. S. Shear Force at the Cell-Matrix Interface: Enhanced Analysis For Microfabricated Post Array Detectors. Mechanics & Chemistry of Biosystems. 2, 1-16 (2005).
