Microfabricated Pós-Array-detectores (mPADs): uma abordagem para isolar Forças Mecânica
Summary
Neste vídeo, demonstramos como fabricar e utilizar detectores microfabricated array post (mPADs) para avaliar as modulações da contratilidade celular.
Abstract
Neste vídeo, vamos apresentar nossa abordagem para medir forças de tração celular usando uma matriz microfabricated de posts. Forças de tração são geradas através de miosina-actina interações e desempenhar um papel importante em nossa fisiologia. Durante o desenvolvimento, elas permitem que as células a se deslocar de um local para outro a fim de formar as estruturas iniciais do tecido. Forças de tração ajudam nos processos de cura. Elas são necessárias para o fechamento adequado das feridas ou a migração de leucócitos e rastejando através do nosso corpo. Essas mesmas forças podem ser prejudiciais à nossa saúde no caso de metástase de câncer ou o crescimento vascular para um tumor. O método mais comum pelo qual o estudo de células in vitro tem sido a de usar um prato de vidro ou poliestireno. No entanto, a rigidez dos substratos torna impossível fisicamente medir forças de tração de células, e há relativamente poucos métodos para estudar as forças de tração. Nosso laboratório desenvolveu uma técnica para superar essas limitações. O método é baseado em um conjunto vertical de cantilevers flexível, a rigidez ea escala de tamanho das quais são tais que células individuais, distribuídos por cantilevers muitos e desviá-los no processo. Os pilares que usamos são 3 mm de diâmetro, 10 mM de altura, e são configurados em uma matriz regular com 9 mM espaçamento de centro a centro. Mas essas dimensões físicas podem ser facilmente variados para acomodar uma variedade de estudos. Começamos com um mestre de silício, mas as mensagens finais são feitas de borracha de silicone chamado poli (dimetil siloxano), ou PDMS. Podemos medir as deflexões sob um microscópio e calcular a magnitude ea direção das forças de tração necessária para produzir as deflexões observadas. Chamamos esses substratos microfabricated pós-array-detectores, ou mPADs. Aqui, vamos mostrar como podemos fabricar e usar o mPADs para avaliar modulações da contratilidade celular.
Protocol
Riferimenti
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